菌落計(jì)數(shù)器方法(菌落計(jì)數(shù)器的使用方法)

1.菌落計(jì)數(shù)器的使用方法

1、將電源插頭插入220V電源插座內(nèi)。將探筆插入儀器上的探筆插孔內(nèi)。

2、將電源開關(guān)撥向開，計(jì)數(shù)池內(nèi)燈亮。同時顯示窗內(nèi)顯示明亮的，表示允許進(jìn)行計(jì)數(shù)。

3、將待檢的培養(yǎng)皿底朝上放入計(jì)數(shù)池內(nèi)。用探筆在培養(yǎng)皿底面對所有的菌落逐個點(diǎn)數(shù)。此時，菌落處被標(biāo)上顏色，顯示窗內(nèi)數(shù)字自動累加。

4、用放大鏡仔細(xì)檢查，確認(rèn)點(diǎn)數(shù)無遺漏，計(jì)數(shù)即已完畢。

5、顯示窗內(nèi)的數(shù)字即為該培養(yǎng)皿內(nèi)的菌落數(shù)。

6、記錄數(shù)字后取出培養(yǎng)皿。按復(fù)按鈕，顯示恢復(fù)，為另一培養(yǎng)皿的計(jì)數(shù)做好準(zhǔn)備。

2.菌落計(jì)數(shù)有哪些的方法

原發(fā)布者：jxc2520

食品微生物學(xué)檢驗(yàn)菌落總數(shù)測定一、培養(yǎng)基和試劑1、平板計(jì)數(shù)瓊脂（platecountagar,PCA）培養(yǎng)基成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g瓊脂15.0g蒸餾水1000mLpH7.0±0.2制法：將上述成分加于蒸餾水中，煮沸溶解，調(diào)節(jié)pH。分裝試管或錐形瓶，121℃高壓滅菌15min。2、磷酸鹽緩沖液成分磷酸二氫鉀（KH2PO4）34.0g蒸餾水500mLpH7.2制法：貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15min。3、無菌生理鹽水成分氯化鈉8.5g蒸餾水1000mL制法：稱取8.5g氯化鈉溶于1000mL蒸餾水中，121℃高壓滅菌15min。二、操作步驟樣品的稀釋1、固體和半固體樣品：稱取25g樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質(zhì)杯內(nèi)，8000r/min~10000r/min均質(zhì)1min~2min，或放入盛有225mL稀釋液的無菌均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打1min~2min，制成1:10的樣品勻液。2、液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品置盛有225mL磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量

3.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法有哪些

統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法有直接計(jì)數(shù)法 和間接計(jì)數(shù)法兩種。

1. 直接計(jì)數(shù)法

直接計(jì)數(shù)法是將稀釋的樣品滴在計(jì) 數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì) 數(shù)4?5個中格的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小 格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每 毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。計(jì)算公式 為：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平 均細(xì)菌數(shù)X400X1 000X稀釋倍數(shù)。這 種方法的優(yōu)點(diǎn)是所需設(shè)備比較簡單，能 迅速得到結(jié)果，而且在計(jì)數(shù)的同時還可 以觀察到所研究的微生物的形態(tài)特征； 缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌與活菌。

2. 間接計(jì)數(shù)法

在應(yīng)用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時，首 先要將待測樣品配制成均勻的系列稀釋 液，盡量使微生物細(xì)胞分散開，再把稀釋 液接種到平板上，進(jìn)行培養(yǎng)觀察。但值 得注意的是，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌 的實(shí)際數(shù)目低，而且統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般用 菌落數(shù)而不用活菌數(shù)來表示。計(jì)算公式 為：每克樣品中的菌落數(shù)= （C+V）X M，其中，C表示某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V表示涂布平板時所 用的稀釋液的體積（mL）,M代表稀釋 倍數(shù)。

4.微生物計(jì)數(shù)方法有哪些

微生物計(jì)數(shù)方法：

1. 血細(xì)胞計(jì)數(shù)法

將稀釋的菌液樣品滴在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下計(jì)算4~5個中格的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再以此為依據(jù)，估算總菌數(shù)。

①此法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌和活菌。

②對壓在小方格界線上的細(xì)菌，應(yīng)當(dāng)取平均值計(jì)數(shù)。

③此法可用于測定培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化

2. 稀釋涂布平板法

每個活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落.培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌.

①這一方法常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目

②統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個活多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落.因此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示.

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定.但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營養(yǎng)體等.

④此法若不培養(yǎng)成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計(jì)數(shù)，這樣又稱涂片計(jì)數(shù)法.染色可用臺盼藍(lán)，臺盼藍(lán)能使死細(xì)胞染成藍(lán)色，可分別計(jì)數(shù)死細(xì)胞和活細(xì)胞.

3. 濾膜法

濾膜法是當(dāng)樣品中菌數(shù)很低時，可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器.然后將濾膜干燥、染色，并經(jīng)處理使膜透明，再在顯微鏡下計(jì)算膜上（或一定面積上）的細(xì)菌數(shù).

此法也可以通過培養(yǎng)觀察形成的菌落數(shù)來推算樣品中的菌數(shù).例如測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目：將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng).在該培養(yǎng)基上大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目.

此法也是統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目.

4. 比濁法

在一定范圍內(nèi)，菌是懸液中細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大.因此可借助與分光光度計(jì)，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量.實(shí)驗(yàn)測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi)，否則不準(zhǔn)確.

5. 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法

在課本生物選修1生物技術(shù)實(shí)踐P22中“除了上述活菌計(jì)數(shù)法外，顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法.”這里說的顯微鏡直接計(jì)數(shù)，我認(rèn)為應(yīng)該是在稀釋涂布的基礎(chǔ)上不培養(yǎng)成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計(jì)數(shù).再如濾膜法也一樣，可以有兩種情況.

另外，微生物計(jì)數(shù)法發(fā)展迅速，多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)目

微生物計(jì)數(shù)：

病毒以外的微生物的計(jì)數(shù)。樣品中可測到總的（死的和活的）細(xì)胞數(shù)，稱為總細(xì)胞數(shù)，樣品中可測到的活的細(xì)胞數(shù)稱活細(xì)胞數(shù)。

總細(xì)胞數(shù)可用電子儀器或直接計(jì)數(shù)法測定。含有低細(xì)胞濃度的液體樣品?？梢杂媚み^濾并在膜上對細(xì)胞染色，在顯微鏡下計(jì)數(shù)活細(xì)胞數(shù)的側(cè)定。可由：（1）在計(jì)數(shù)室內(nèi)測定用活體染色劑染色的樣品，（2）稀釋平板法，（3）菌落計(jì)數(shù)，樣品中活細(xì)胞數(shù)目由接種了樣品的，發(fā)育在適合培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目推定。培養(yǎng)基和（或）培養(yǎng)條件的選擇，可以極大地影響形成菌落的活細(xì)胞數(shù)。某些類型的細(xì)胞，趨向于叢生或鏈生，這些微生物的準(zhǔn)確的活細(xì)胞計(jì)數(shù)不能用上述方法，可依據(jù)“單位體積菌落形成單位，（cotony-formingunit/ valwne）來計(jì)數(shù)。 上述方法，一般適用于大部分細(xì)菌和泡子計(jì)數(shù)，其中一些方法，'可用于某些藻類、真菌和原生動物。在顯微鏡下，計(jì)數(shù)迅速運(yùn)動的原生動物，可以用粘性懸浮培養(yǎng)基，如2-5I甲基纖維素。降低它們的運(yùn)動逮度。

5.統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法有哪些

統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法有直接計(jì)數(shù)法 和間接計(jì)數(shù)法兩種。

1. 直接計(jì)數(shù)法直接計(jì)數(shù)法是將稀釋的樣品滴在計(jì) 數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計(jì) 數(shù)4?5個中格的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小 格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再按公式求出每 毫升樣品中所含的細(xì)菌數(shù)。計(jì)算公式 為：每毫升原液所含細(xì)菌數(shù)=每小格平 均細(xì)菌數(shù)X400X1 000X稀釋倍數(shù)。

這 種方法的優(yōu)點(diǎn)是所需設(shè)備比較簡單，能 迅速得到結(jié)果，而且在計(jì)數(shù)的同時還可 以觀察到所研究的微生物的形態(tài)特征； 缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌與活菌。2. 間接計(jì)數(shù)法在應(yīng)用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時，首 先要將待測樣品配制成均勻的系列稀釋 液，盡量使微生物細(xì)胞分散開，再把稀釋 液接種到平板上，進(jìn)行培養(yǎng)觀察。

但值 得注意的是，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌 的實(shí)際數(shù)目低，而且統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般用 菌落數(shù)而不用活菌數(shù)來表示。計(jì)算公式 為：每克樣品中的菌落數(shù)= （C+V）X M，其中，C表示某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V表示涂布平板時所 用的稀釋液的體積（mL）,M代表稀釋 倍數(shù)。

6.微生物計(jì)數(shù)方法有哪些

測定微生物細(xì)胞數(shù)目的方法有很多，介紹幾種1.血細(xì)胞計(jì)數(shù)法將稀釋的菌液樣品滴在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，在顯微鏡下計(jì)算4~5個中格的細(xì)菌數(shù)，并求出每個小格所含細(xì)菌的平均數(shù)，再以此為依據(jù)，估算總菌數(shù)。

①此法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分死菌和活菌。②對壓在小方格界線上的細(xì)菌，應(yīng)當(dāng)取平均值計(jì)數(shù)。

③此法可用于測定培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化2.稀釋涂布平板法原理：每個活細(xì)菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。

①這一方法常用來統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目②統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，原因是當(dāng)兩個活多個細(xì)胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細(xì)菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線菌或絲狀真菌或絲狀藍(lán)細(xì)菌等的營養(yǎng)體等。

④此法若不培養(yǎng)成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計(jì)數(shù)，這樣又稱涂片計(jì)數(shù)法。染色可用臺盼藍(lán)，臺盼藍(lán)能使死細(xì)胞染成藍(lán)色，可分別計(jì)數(shù)死細(xì)胞和活細(xì)胞。

3.濾膜法 濾膜法是當(dāng)樣品中菌數(shù)很低時，可將一定體積的湖水、海水或飲用水燈樣品通過膜過濾器。然后將濾膜干燥、染色，并經(jīng)處理使膜透明，再在顯微鏡下計(jì)算膜上（或一定面積上）的細(xì)菌數(shù)。

此法也可以通過培養(yǎng)觀察形成的菌落數(shù)來推算樣品中的菌數(shù)。例如測定飲用水中大腸桿菌的數(shù)目：將已知體積的水過濾后，將濾膜放在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

在該培養(yǎng)基上大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，可根據(jù)培養(yǎng)基上黑色菌落的數(shù)目，計(jì)算出水樣中大腸桿菌的數(shù)目。此法也是統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目。

4.比濁法原理是在一定范圍內(nèi)，菌是懸液中細(xì)胞濃度與混濁度成正比，即與光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可借助與分光光度計(jì)，在一定波長下，測定菌懸液的光密度，以光密度表示菌量。

實(shí)驗(yàn)測量時一定要控制在菌濃度與光密度成正比的線性范圍內(nèi)，否則不準(zhǔn)確。 5.顯微鏡直接計(jì)數(shù)法在課本生物選修1生物技術(shù)實(shí)踐P22中“除了上述活菌計(jì)數(shù)法外，顯微鏡直接計(jì)數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法?！?/p>

這里說的顯微鏡直接計(jì)數(shù)，我認(rèn)為應(yīng)該是在稀釋涂布的基礎(chǔ)上不培養(yǎng)成菌落而通過染色的方法在顯微鏡下直接計(jì)數(shù)。再如濾膜法也一樣，可以有兩種情況。

另外，微生物計(jì)數(shù)法發(fā)展迅速，多種多樣的快速、簡易、自動化的儀器和裝置等方法可以用來統(tǒng)計(jì)微生物的數(shù)目。

7.微生物計(jì)數(shù)方法有哪些

微生物的顯微直接計(jì)數(shù)法

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/p>

了解血球計(jì)數(shù)板的構(gòu)造、計(jì)數(shù)原理和計(jì)數(shù)方法，掌握顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的技能。

二、實(shí)驗(yàn)原理

測定微生物細(xì)胞數(shù)量的方法很多，通常采用的有顯微直接計(jì)數(shù)法和平板計(jì)數(shù)法。

顯微計(jì)數(shù)法適用于各種含單細(xì)胞菌體的純培養(yǎng)懸浮液，如有雜菌或雜質(zhì)，常不易分辨。菌體較大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球計(jì)數(shù)板，一般細(xì)菌則采用彼得羅夫·霍澤（Petrof Hausser）細(xì)菌計(jì)數(shù)板。兩種計(jì)數(shù)板的原理和部件相同，只是細(xì)菌計(jì)數(shù)板較薄，可以使用油鏡觀察。而血球計(jì)數(shù)板較厚，不能使用油鏡，計(jì)數(shù)板下部的細(xì)菌不易看清。

血球計(jì)數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計(jì)數(shù)區(qū)（圖21-1），計(jì)數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計(jì)數(shù)區(qū)分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計(jì)數(shù)區(qū)分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計(jì)數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同特點(diǎn)，即計(jì)數(shù)區(qū)都由400個小方格組成。

計(jì)數(shù)區(qū)邊長為1mm，則計(jì)數(shù)區(qū)的面積為l mm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計(jì)數(shù)區(qū)的高度為0.1mm，所以每個計(jì)數(shù)區(qū)的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3。

使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時，先要測定每個小方格中微生物的數(shù)量，再換算成每毫升菌液（或每克樣品）中微生物細(xì)胞的數(shù)量。

已知：1mm3體積=10 mm*10 mm*10 mm= 1000mm3

所以：1mm3體積應(yīng)含有小方格數(shù)為1000mm3/1/4000mm3=4*106個小方格，即系數(shù)K=4*106 。

因此：每ml菌懸液中含有細(xì)胞數(shù)= 每個小格中細(xì)胞平均數(shù)（N）*系數(shù)（K）*菌液稀釋倍數(shù)（d）

三、實(shí)驗(yàn)器材

1.活材料：釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培養(yǎng)液。

2.器材：顯微鏡、血球計(jì)數(shù)板、蓋玻片（22mm*22mm）、吸水紙、計(jì)數(shù)器、滴管、擦鏡紙。

四、實(shí)驗(yàn)方法

1.視待測菌懸液濃度，加無菌水適當(dāng)稀釋（斜面一般稀釋到10-2），以每小格的菌數(shù)可數(shù)為度。

2.取潔凈的血球計(jì)數(shù)板一塊，在計(jì)數(shù)區(qū)上蓋上一塊蓋玻片。

3.將酵母菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計(jì)數(shù)板中間平臺兩側(cè)的溝槽內(nèi)沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計(jì)數(shù)區(qū)，勿使氣泡產(chǎn)生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計(jì)數(shù)區(qū)上，不要使計(jì)數(shù)區(qū)兩邊平臺沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計(jì)數(shù)區(qū)深度的升高。然后加蓋蓋玻片（勿使產(chǎn)生氣泡）。4.靜置片刻，將血球計(jì)數(shù)板置載物臺上夾穩(wěn)，先在低倍鏡下找到計(jì)數(shù)區(qū)后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察并計(jì)數(shù)。由于生活細(xì)胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應(yīng)減弱光照的強(qiáng)度。

5.計(jì)數(shù)時若計(jì)數(shù)區(qū)是由16個大方格組成，按對角線方位，數(shù)左上、左下、右上、右下的4個大方格（即100小格）的菌數(shù)。如果是25個大方格組成的計(jì)數(shù)區(qū)，除數(shù)上述四個大方格外，還需數(shù)中央l個大方格的菌數(shù)（即80個小格）。如菌體位于大方格的雙線上，計(jì)數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。

6.對于出芽的酵母菌，芽體達(dá)到母細(xì)胞大小一半時，即可作為兩個菌體計(jì)算。每個樣品重復(fù)計(jì)數(shù)2—3次（每次數(shù)值不應(yīng)相差過大，否則應(yīng)重新操作），求出每一個小格中細(xì)胞平均數(shù)（N），按公式計(jì)算出每ml(g)菌懸液所含酵母菌細(xì)胞數(shù)量。

7.測數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計(jì)數(shù)板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網(wǎng)格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，放入盒內(nèi)保存。

五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)：

將實(shí)驗(yàn)結(jié)果填入下表中：

計(jì)數(shù)次數(shù) 每個大方格菌數(shù) 稀 釋

倍 數(shù) 試管斜面中的總菌數(shù) 平均值

1 2 3 4 5

第一次

第二次

8.菌落計(jì)數(shù)器的介紹

現(xiàn)在隨著科技的進(jìn)步，菌落計(jì)數(shù)技術(shù)日趨完善。主要體現(xiàn)在配置越來越高，功能越來越全。計(jì)數(shù)的速度越來越快，準(zhǔn)確性也越來越高。所以，價格也就節(jié)節(jié)攀升。一般對于精確度要求不高的用戶，可以考慮手動的或者半自動的菌落計(jì)數(shù)器。手動的價格比較便宜，市場價大約都在800-1200元，稍微好點(diǎn)的，是半自動的帶有語音讀報(bào)功能的，放大倍數(shù)在3級以上的，市場價要2500元左右，這種已經(jīng)能夠滿足大多數(shù)用戶的計(jì)數(shù)要求。較高配置的全自動計(jì)數(shù)器，多用在微生物實(shí)驗(yàn)室里，像素主要有300萬，900萬和1000萬三個規(guī)格。軟件方面添加了很多分析功能，價格也在3-8萬。進(jìn)口的菌落計(jì)數(shù)器主要來自三個國家，德國、英國和法國的。就相同功能的半自動儀器，國產(chǎn)的和進(jìn)口的價格相差大概在2-3倍。全自動的價格也相差一倍之多。需求者應(yīng)該充分考慮自己的需求側(cè)重點(diǎn)和預(yù)算進(jìn)行選購。