滅菌具體方法(滅菌的具體方法)
1.滅菌的具體方法有哪些
(1)加熱滅菌法 利用高溫來(lái)殺死微生物（超過(guò)最高生長(zhǎng)溫度）的方法。
加熱滅菌的原理：當(dāng)高溫作用于微生物時(shí)，首先引起細(xì)胞內(nèi)生理生化反應(yīng)速率加快，機(jī)體內(nèi)對(duì)溫度敏感的物質(zhì)如蛋白質(zhì)、核酸等，隨著溫度的增高而遭受不可逆的破壞，盡而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)體的變化、酶結(jié)構(gòu)的破壞，從而使細(xì)胞失去了生活機(jī)能上的協(xié)調(diào)，停止了生長(zhǎng)發(fā)育。隨著高溫的繼續(xù)作用，細(xì)胞內(nèi)原生質(zhì)便發(fā)生凝固，酶結(jié)構(gòu)完全破壞，活動(dòng)消失，生化反應(yīng)停止，滲透交換等新陳代謝活動(dòng)消失，細(xì)胞死亡。
加熱滅菌可分干熱滅菌和濕熱滅菌兩大類(lèi)。 1）干熱滅菌 利用灼燒或干熱空氣滅菌而沒(méi)有飽和水蒸氣參加的滅菌法稱(chēng)為干熱滅菌法。
由于干熱滅菌使用方便，方法簡(jiǎn)單，故在生產(chǎn)上廣泛應(yīng)用。如火焰滅菌法：直接利用火焰把微生物燒死，故又稱(chēng)焚燒滅菌法。
采用此法滅菌既徹底又迅速，但只適用于金屬制的接種工具、試管口及污染物品等的處理。熱空氣滅菌法：即在電熱恒溫干燥箱中利用干熱空氣來(lái)滅菌。
2）濕熱滅菌 即利用蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。濕熱滅菌又分為高壓、常壓、間歇滅菌和巴氏滅菌4種。
①高壓蒸汽滅菌 由于高壓蒸汽具有較強(qiáng)的穿透力和較常壓高的溫度，能大大縮短滅菌時(shí)間，提高工作效率，加之蛋白質(zhì)在濕熱條件下容易變性，在熱蒸汽條件下，細(xì)菌的芽孢在120℃，經(jīng)20~30分鐘可全部被殺死。如滅菌材料體積較大，不易被穿透時(shí)，可將壓力增加到0.152兆帕，延長(zhǎng)至1~2小時(shí)。
在高壓蒸汽滅菌中，滅菌溫度隨蒸汽壓力的增加而升高（圖2-6）。 圖2-6 高壓蒸汽滅菌鍋 在使用高壓滅菌鍋時(shí)，要完全排出鍋內(nèi)的空氣而以飽和蒸汽代之。
如果空氣不排除干凈，則鍋內(nèi)溫度將低于同樣壓力下由純飽和蒸汽產(chǎn)生的溫度，影響滅菌效果。 此法適用于各種耐熱物品的滅菌，如一般培養(yǎng)基、生理鹽水等各種溶液、玻璃器皿、工作服等。
所采用的蒸汽壓力與時(shí)間，應(yīng)根據(jù)待滅菌物品的性質(zhì)、體積與容器類(lèi)型等決定。 ②常壓蒸汽滅菌 這是采用自然壓力、100℃蒸汽進(jìn)行滅菌的方法。
它設(shè)備簡(jiǎn)單、成本低，當(dāng)前使用最廣泛。只要砌一個(gè)爐灶，買(mǎi)1~2只大鍋，上面用磚和水泥砌成，也可用大鐵桶、木桶等，體積大小可自行決定，但不宜過(guò)大，以裝800~1500瓶為好。
設(shè)計(jì)常壓灶時(shí)應(yīng)注意的問(wèn)題：大小根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模來(lái)定，灶頂部最好制成拱圓形，這樣冷凝水可沿灶的內(nèi)壁下流而不會(huì)打濕棉塞；灶倉(cāng)內(nèi)要有層架結(jié)構(gòu)，以便分層裝入滅菌物；灶上應(yīng)安裝溫度計(jì)，可隨時(shí)觀察灶內(nèi)溫度的變化；因滅菌時(shí)間長(zhǎng)，鍋內(nèi)水不夠蒸發(fā)，故容量大的灶要安裝加水裝置；灶倉(cāng)的密閉程度要盡可能高，這樣既提高滅菌效果，又節(jié)省燃料。菇農(nóng)在生產(chǎn)中還常用一種小型蒸汽發(fā)生裝置，引出蒸汽后直接通到下邊用木條塹起、四周用多層塑料布密封的菌袋堆中進(jìn)行常壓滅菌。
這種方法不用建灶，簡(jiǎn)便省工（圖2-7）。常壓滅菌一般水燒開(kāi)后保持8~10小時(shí)，悶一夜即可。
圖2-7 簡(jiǎn)易常壓滅菌法 ③常壓間歇蒸汽滅菌法 這是利用常壓蒸汽反復(fù)幾次滅菌的方法。具體做法是將待滅菌物品放在鍋內(nèi)，100℃處理1小時(shí)左右，殺死微生物的營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞，讓其冷卻至30℃左右，此時(shí)芽胞會(huì)萌發(fā)，再以同樣方法加熱處理，反復(fù)3次，可達(dá)到滅菌目的。
該方法可用于不耐高溫的藥品、營(yíng)養(yǎng)物、特殊培養(yǎng)基的滅菌。 ④低溫巴氏滅菌法 即在60~70℃下，經(jīng)一定時(shí)間，殺死有害微生物的方法。
適應(yīng)于不耐高溫的物品消毒。有些培養(yǎng)基，在高溫下遭到破壞，用此法既可殺死致病微生物的營(yíng)養(yǎng)體，又能使培養(yǎng)基的成分不致受到嚴(yán)重破壞。
食用菌生產(chǎn)中培養(yǎng)料堆積發(fā)酵工藝，就是利用這個(gè)原理殺死其中的病蟲(chóng)、雜菌。 （2）過(guò)濾除菌法 又分液體過(guò)濾和空氣過(guò)濾兩種，就是采用機(jī)械的方法，設(shè)計(jì)一種濾孔比細(xì)菌還小的篩子，做成各種過(guò)濾器，通過(guò)機(jī)械過(guò)濾，只讓液體培養(yǎng)基或空氣從篩孔流出，各種微生物菌體則留在篩子上，從而達(dá)到除菌的目的。
這種方法適用于對(duì)熱不穩(wěn)定的體積小的液體培養(yǎng)基（如動(dòng)物血清、蛋白質(zhì)、酶、維生素等）及氣體的滅菌。超凈工作臺(tái)的工作原理就是將帶菌空氣通過(guò)過(guò)濾滅菌形成無(wú)菌空氣，從風(fēng)洞中吹出，來(lái)造成工作臺(tái)范圍的無(wú)菌狀態(tài)。
過(guò)濾滅菌的最大優(yōu)點(diǎn)是不破壞培養(yǎng)基中各種物質(zhì)的化學(xué)成分。常用的過(guò)濾器有用硅藻土制的、石棉制的、陶瓷土制的，也有用火棉膠、硝化纖維素濾膜制成的。
（3）輻射滅菌法 利用輻射產(chǎn)生的能量進(jìn)行殺菌的方法稱(chēng)輻射滅菌。輻射可分電離輻射和非電離輻射兩種，α-射線、β-射線、γ-射線、X-射線、中子和質(zhì)子、微波等屬電離輻射，紫外線、臭氧、日光為非電離輻射。
1）紫外線滅菌 紫外線殺菌的原理是利用紫外線的輻射作用。用燈管直接照射細(xì)菌使其發(fā)生光化學(xué)反應(yīng)，將細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)誘導(dǎo)形成胸腺嘧啶雙聚體，從而抑制DNA的復(fù)制而發(fā)生變性、致死。
另一方面，空氣在紫外線照射下產(chǎn)生的臭氧（O3），也具有一定的殺菌作用。紫外線的有效作用距離為1.2~2.0米。
紫外燈一般懸吊在接種室或培養(yǎng)室的上方，個(gè)數(shù)依房間大小而定，容1~2個(gè)人操作的接種室，安裝一個(gè)30瓦的紫外燈就可以了。在每次接種前，應(yīng)將所需的器具一起放入接種室（箱）內(nèi)，然后打開(kāi)紫外燈照射。
如果接種室體積較大，開(kāi)燈照射2小時(shí)。
2.滅菌方法有哪些
1.干熱滅菌法
1.1灼燒與火焰滅菌：灼燒主要是用于接種工具滅菌，在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌，火焰滅菌通常用于無(wú)菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過(guò)火焰數(shù)次，利用火焰對(duì)管口等進(jìn)行滅菌，阻止管口污染，作為無(wú)菌操作過(guò)程中的輔助滅菌手段。
1.2干烤滅菌：利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后，均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。通常加熱至160℃，保溫2h可完全滅菌。但不宜超過(guò)170℃，玻璃量具易變形。降溫過(guò)速，驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時(shí)裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密，應(yīng)有空隙，利于熱空氣流動(dòng)，過(guò)密，致使溫度不均，部分物品滅菌不徹底。
2.濕熱滅菌法
通過(guò)加壓提高蒸汽溫度，用高壓蒸汽滅菌，穿透力強(qiáng)，溫度高，滅菌效果最好。
注意事項(xiàng)：1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。有冷空氣存在時(shí)，在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低，而冷空氣排出越少，溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時(shí)，為保證達(dá)到規(guī)定的溫度，必須將冷空氣完全排除。否則，雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。
3.紫外線 殺菌譜廣，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效能受到一定限制。
紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時(shí)間、溫度與濕度等因素有關(guān)。
我國(guó)規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。一般紫外燈使用超過(guò)100h，則應(yīng)更換。表面有塵土，降低滅菌效果。紫外燈殺菌的溫度以20~40℃，相對(duì)濕度40%~60%為宜。
3.常用的滅菌方法有哪些
原發(fā)布者：honey_琴
常用滅菌方法簡(jiǎn)介一、輻射滅菌法本法系指滅菌物品置于適宜放射源輻射的γ射線或適宜的電子加速器發(fā)生的電子束中進(jìn)行電離輻射而達(dá)到殺滅微生物的方法。本法最常用的60Co-γ射線輻射滅菌。醫(yī)療器械、容器、生產(chǎn)輔助用品、不受輻射破壞的原料藥及成品等均可用本法滅菌。采用輻射滅菌法滅菌后的產(chǎn)品其SAL應(yīng)《10-6。γ射線輻射滅菌所控制的參數(shù)主要是輻射劑量（指滅菌物品的吸收劑量）。該劑量的制定應(yīng)考慮滅菌物品的適應(yīng)性及可能污染的微生物最大數(shù)量及最強(qiáng)抗輻射力，事先應(yīng)驗(yàn)證所使用的劑量不影響被滅菌物品的安全性、有效性及穩(wěn)定性。常用的輻射滅菌吸收劑量為25KGy。對(duì)最終產(chǎn)品、原料藥、某些醫(yī)療器材應(yīng)盡可能采用低輻射劑量滅菌。滅菌前，應(yīng)對(duì)被滅菌物品微生物污染的數(shù)量和抗輻射強(qiáng)度進(jìn)行測(cè)定，以評(píng)價(jià)滅菌過(guò)程賦予該滅菌物品的無(wú)菌保證水平。滅菌時(shí)，應(yīng)采用適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)或物理方法對(duì)滅菌物品吸收的輻射劑量進(jìn)行監(jiān)控，以充分證實(shí)滅菌物品吸收的劑量是在規(guī)定的限度內(nèi)。如采用與滅菌物品一起被輻射的放射性劑量計(jì)，劑量計(jì)要置于規(guī)定的部位。在初安裝時(shí)劑量計(jì)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)源進(jìn)行校正，并定期進(jìn)行再校正。60Co-γ射線輻射滅菌法常用的生物指示劑為短小芽孢桿菌孢子（）。二、干熱滅菌法本法系指將物品置于干熱滅菌柜、隧道滅菌器等設(shè)備中，利用干熱空氣達(dá)到殺滅微生物或消除熱原物質(zhì)的方法。適用于耐高溫但不宜用濕熱滅菌法滅菌的物品滅菌，如玻璃器
4.常用的消毒滅菌的方法有哪些
消毒滅菌的方法 （一）物理消毒滅菌法 利用物理因子殺滅微生物的方法.包括熱力消毒滅菌、輻射消毒、空氣凈化、超聲波消毒和微波消毒等。
1.熱力消毒滅菌 高溫能使微生物的蛋白質(zhì)和酶變性或凝固（結(jié)構(gòu)改變導(dǎo)致功能喪失），新陳代謝受到障礙而死亡，從而達(dá)到消毒與滅菌的目的.在消毒中，熱可分為濕熱與干熱兩大類(lèi)。 干熱是指相對(duì)濕度在20%以下的高熱，干熱消毒滅菌是由空氣導(dǎo)熱，傳熱效果較慢.一般繁殖體在干熱80-100℃中經(jīng)1小時(shí)可以殺死，芽胞需160-170℃經(jīng)2小時(shí)方可殺死。
（1）燃燒法 是一種簡(jiǎn)單、迅速、徹底的滅菌方法，因?qū)ξ锲返钠茐男源?，故?yīng)用范圍有限。 燒灼法：一些耐高溫的實(shí)驗(yàn)器械（金屬、搪瓷類(lèi)），在急用或無(wú)條件用其他方法消毒時(shí)可采用此法.將器械放在火焰上燒灼1-2分鐘.若為搪瓷容器，可倒少量95%乙醇，慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)容器，使乙醇分布均勻，點(diǎn)火燃燒至熄滅約1-2分鐘.采集作細(xì)菌培養(yǎng)的標(biāo)本時(shí)，在留取標(biāo)本前后（即啟蓋后，閉蓋前）都應(yīng)將試管（瓶）口和蓋子置于火焰上燒灼，來(lái)回旋轉(zhuǎn)2-3次。
燃燒時(shí)要注意安全，須遠(yuǎn)離易燃易爆物品，如氧氣、汽油、乙醚等.燃燒過(guò)程不得添加乙醇，以免引起火焰上竄而致灼傷或火災(zāi).銳利刀剪為保護(hù)刀鋒，不宜用燃燒滅菌法。 焚燒：某些特殊感染，如破傷風(fēng)、氣性壞疽、綠膿桿菌感染的敷料，以及其它已污染且無(wú)保留價(jià)值的物品，如污紙、垃圾等，應(yīng)放入焚燒爐內(nèi)焚燒，使之炭化。
（2）干烤法 電熱烤箱：利用烤箱的熱空氣消毒滅菌。烤箱通電加熱后的空氣在一定空間不斷對(duì)流，產(chǎn)生均一效應(yīng)的熱空氣直接穿透物體.一般繁殖體在干熱80-100℃中經(jīng)1小時(shí)可以殺死，芽胞、病毒需160-170℃經(jīng)2小時(shí)方可殺死.熱空氣消毒滅菌法適用于玻璃器皿、瓷器以及明膠海棉、液體石臘、各種粉劑、軟膏等.滅菌后待箱內(nèi)溫度降至50-40℃以下才能開(kāi)啟柜門(mén)，以防炸裂。
微波消毒：微波是一種高頻電磁波，其殺菌的作用原理，一為熱效應(yīng)，所及之處產(chǎn)生分子內(nèi)部劇烈運(yùn)動(dòng)，使物體里外濕度迅速升高；一為綜合效應(yīng)，諸如化學(xué)效應(yīng)、電磁共振效應(yīng)和場(chǎng)致力效應(yīng)。目前已廣泛應(yīng)用于食品、藥品的消毒，用微波滅菌手術(shù)器械包、微生物實(shí)驗(yàn)室用品等亦有報(bào)告.若物品先經(jīng)1%過(guò)氧乙酸或0.5%新潔爾滅濕化處理后，可起協(xié)同殺菌作用，照射2分鐘，可使殺芽胞率由98.81%增加到99.98%-99.99%。
微波對(duì)人體有一定危害性，其熱效應(yīng)可損傷眼睛晶狀體等，長(zhǎng)時(shí)間照射還可致神經(jīng)功能紊亂.使用時(shí)可設(shè)置不透微波的金屬屏障或戴特制防護(hù)眼境等。 濕熱消毒滅菌 由空氣和水蒸氣導(dǎo)熱，傳熱快，穿透力強(qiáng)，濕熱滅菌法比干熱滅菌法所需溫度低、時(shí)間短。
（1）煮沸法 將水煮沸至100℃，保持5-10分鐘可殺滅繁殖體，保持1-3小時(shí)可殺滅芽胞.在水中加入碳酸氫鈉至1%-2%濃度時(shí)，沸點(diǎn)可達(dá)105℃，能增強(qiáng)殺菌作用，還可去污防銹.在高原地區(qū)氣壓低、沸點(diǎn)低的情況下，要延長(zhǎng)消毒時(shí)間（海拔每增高300m，需延長(zhǎng)消毒時(shí)間2分鐘）.此法適用于不怕潮濕耐高溫的搪瓷、金屬、玻璃、橡膠類(lèi)物品。 煮沸前物品涮洗干凈，打開(kāi)軸節(jié)或蓋子，將其全部浸入水中.大小相同的碗、盆等均不能重疊，以確保物品各面與水接觸.銳利、細(xì)小、易損物品用紗布包裹，以免撞擊或散落.玻璃、搪瓷類(lèi)放入冷水或溫水中煮；金屬、橡膠類(lèi)則待水沸后放入.消毒時(shí)間均從水沸后開(kāi)始計(jì)時(shí).若中途再加入物品，則重新計(jì)時(shí)，消毒后及時(shí)取出物品，保持其無(wú)菌狀態(tài)。
經(jīng)煮沸滅菌的物品.“無(wú)菌”有效期不超過(guò)6小時(shí)。 （2）高壓蒸汽滅菌法 高壓蒸汽滅菌器裝置嚴(yán)密，輸入蒸汽不外逸，溫度隨蒸汽壓力增高而升高，當(dāng)壓力增至103-206kPa時(shí)，濕度可達(dá)121.3-132℃.高壓蒸汽滅菌法就是利用高壓和高熱釋放的潛熱進(jìn)行滅菌，為目前可靠而有效的滅菌方法.適用于耐高溫、高壓，不怕潮濕的物品，如敷料、手術(shù)器械、藥品、細(xì)菌培養(yǎng)基等。
潛熱是指當(dāng)lg100℃的水蒸汽變成lg100℃水時(shí)，釋放出2255.2J的熱量。 高壓蒸汽滅菌的關(guān)鍵問(wèn)題是為熱的傳導(dǎo)提供良好條件，而其中最重要的是使冷空氣從滅菌器中順利排出.因?yàn)槔淇諝鈱?dǎo)熱性差，阻礙蒸汽接觸欲滅菌物品，并且還可減低蒸汽分壓使之不能達(dá)到應(yīng)有的溫度。
手提式高壓蒸汽滅菌器：為金屬圓筒，分為二層，隔層內(nèi)盛水，有蓋，可以旋緊，加熱后產(chǎn)生蒸汽。鍋外有壓力表，當(dāng)蒸汽壓力升高時(shí)，溫度也隨之相應(yīng)升高。
該滅菌器體積小，可自發(fā)蒸汽，便于攜帶。 操作方法如下：在滅菌器中盛水3000ml；將擬滅菌的物品隨同盛裝的桶放入滅菌器內(nèi)；將蓋子上的排氣軟管插于鋁桶內(nèi)壁的的方管中；蓋好蓋子，擰緊元寶螺絲，勿使漏氣；鍋下加熱，打開(kāi)排氣活門(mén)，放出冷空氣（一般在水沸后排氣10-15分鐘左右），關(guān)閉放氣活門(mén)，使壓力逐漸上升至103kPa，溫度達(dá)121.3℃，維持20分鐘后，排氣至“0”時(shí)，慢慢打開(kāi)蓋子.如果突然開(kāi)蓋，冷空氣大量進(jìn)入，蒸汽凝成水滴，使物品潮濕，且玻璃類(lèi)易發(fā)生爆裂。
臥式高壓蒸汽滅菌器：其結(jié)構(gòu)原理同手提式高壓蒸汽滅菌器，因其體積大，一次可滅菌大量物品.操作人員須經(jīng)專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，再關(guān)閉放氣開(kāi)關(guān)，待夾層壓力表達(dá)到滅菌所需壓力時(shí)（約10分鐘后），將蒸汽控制閥移至“消毒”位置，使蒸汽。
5.滅菌方法有哪些
1.干熱滅菌法1.1灼燒與火焰滅菌：灼燒主要是用于接種工具滅菌，在火焰上灼燒即可達(dá)到徹底滅菌，火焰滅菌通常用于無(wú)菌操作中，將試管口、玻璃瓶口、硅氟塑料塞等反復(fù)通過(guò)火焰數(shù)次，利用火焰對(duì)管口等進(jìn)行滅菌，阻止管口污染，作為無(wú)菌操作過(guò)程中的輔助滅菌手段。
1.2干烤滅菌：利用熱輻射及干熱空氣進(jìn)行滅菌。一般將待檢滅菌的物品如金屬、玻璃、陶瓷制品包裝后，均可在烤箱內(nèi)干熱滅菌。
通常加熱至160℃，保溫2h可完全滅菌。但不宜超過(guò)170℃，玻璃量具易變形。
降溫過(guò)速，驟冷易引起玻璃器皿炸裂。干熱滅菌時(shí)裝入干烤箱內(nèi)的物品切勿緊密，應(yīng)有空隙，利于熱空氣流動(dòng)，過(guò)密，致使溫度不均，部分物品滅菌不徹底。
2.濕熱滅菌法通過(guò)加壓提高蒸汽溫度，用高壓蒸汽滅菌，穿透力強(qiáng)，溫度高，滅菌效果最好。注意事項(xiàng)：1.完全排除高壓滅菌器內(nèi)的冷空氣。
有冷空氣存在時(shí)，在同一表壓下所達(dá)到的溫度值要低，而冷空氣排出越少，溫度就低得越多。在高壓蒸汽滅菌時(shí)，為保證達(dá)到規(guī)定的溫度，必須將冷空氣完全排除。
否則，雖然壓力達(dá)到，而溫度達(dá)不到規(guī)定的要求，滅菌就不徹底。3.紫外線 殺菌譜廣，但穿透力弱，影響因素多，殺菌效能受到一定限制。
紫外線消毒效果與紫外線強(qiáng)度、照射時(shí)間、溫度與濕度等因素有關(guān)。我國(guó)規(guī)定紫外燈照射強(qiáng)度距離1m處不低于70μw/cm2。
一般紫外燈使用超過(guò)100h，則應(yīng)更換。表面有塵土，降低滅菌效果。
紫外燈殺菌的溫度以20~40℃，相對(duì)濕度40%~60%為宜。
