免疫學(xué)檢測方法可分為體液免疫和細胞免疫。
體液免疫:
所謂體液免疫,即以B細胞產(chǎn)生抗體來(lái)達到保護目的的免疫機制。負責體液免疫的細胞是B細胞。體液免疫的抗原多為相對分子質(zhì)量在10,000以上的蛋白質(zhì)和多糖大分子,病毒顆粒和細菌表面都帶有不同的抗原,所以都能引起體液免疫。
臨床上一個(gè)反復發(fā)作的化膿感染,常使醫生想到患者是否有免疫缺陷病,一般原發(fā)免疫缺陷發(fā)病年齡很小,而繼發(fā)免疫缺陷病人多在30歲以上。絕大多數免疫缺陷病人多表現為體液和細胞免疫同時(shí)受損,所以應全面檢查這兩方面的功能。遺憾的是,目前應用的檢測方法的局限性,其結果常難以得出明確結論。
細胞免疫:
T細胞受到抗原刺激后,增殖、分化、轉化為致敏T細胞(也叫效應T細胞),當相同抗原再次進(jìn)入機體的細胞中時(shí),致敏T細胞(效應T細胞)對抗原的直接殺傷作用及致敏T細胞所釋放的細胞因子的協(xié)同殺傷作用,統稱(chēng)為細胞免疫。
在抗感染免疫中,細胞免疫主要參與對胞內寄生的病原微生物的免疫應答及對腫瘤細胞的免疫應答,參與遲發(fā)型變態(tài)反應和自身免疫病的形成,參與移植排斥反應及對體液免疫的調節。也可以說(shuō),在抗感染免疫中,細胞免疫既是抗感染免疫的主要力量,參與免疫防護;又是導致免疫病理的重要因素。
以下是幾種常用的免疫學(xué)技術(shù):1.免疫熒光技術(shù) 免疫熒光技術(shù)是利用熒光素標記的抗體(或抗原)檢測組織、細胞或血清 中的相應抗原(或抗體)的方法.由于熒光抗體具有安全、靈敏的特點(diǎn),因此已 廣泛應用在免疫熒光檢測和流式細胞計數領(lǐng)域.根據熒光素標記的方式不同,可 分為直標熒光抗體和間標熒光抗體.間標熒光抗體中一抗并不直接連接熒光素,而是先將一抗結合到蛋白,然后帶有熒光素的二抗再結合至一抗.通過(guò)二抗的結 合,能將信號進(jìn)行放大,因此能在一定程度上提高檢測的靈敏度,但是隨之帶來(lái) 的高背景也降低了檢測的特異性.近年來(lái),隨著(zhù)熒光素和熒光檢測技術(shù)的不斷進(jìn) 步,熒光檢測的靈敏度已經(jīng)接近同位素檢測的水平,直接標記的熒光抗體逐漸取 代間接標記抗體.這些標記了熒光素的抗體直接結合至抗原,大大提高了檢測的 特異性,使檢測的結果更加準確可靠.熒光檢測技術(shù)的發(fā)展,使得免疫熒光技術(shù) 在傳染病診斷上有廣泛的用途,如在細菌、病毒、螺旋體感染的疾病,檢查IgM 抗體,做為近期接觸抗原的標志.利用單克隆熒光直接標記抗體鑒定淋巴細胞的 亞類(lèi).通過(guò)流式細胞儀,針對細胞表面不同抗原,可以同時(shí)使用多種不同的熒光 抗體,對同一細胞進(jìn)行多標記染色.2.放射免疫檢測 放射免疫檢測技術(shù)是目前靈敏度最高的檢測技術(shù),利用放射性同素標記抗 原(或抗體),與相應抗體(或抗原)結合后,通過(guò)測定抗原抗體結合物的放射 性檢測結果.放射性同位素具有pg 級的靈敏度,且利用反復曝光的方法可對痕 量物質(zhì)進(jìn)行定量檢測.但放射性同位素對人體的損傷也限制了該方法的使用.3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 酶聯(lián)免疫檢測是目前應用最廣泛的免疫檢測方法.該方法是將二抗標記上 酶,抗原抗體反應的特異性與酶催化底物的作用結合起來(lái),根據酶作用底物后的 顯色顏色變化來(lái)判斷試驗結果,其敏感度可達ng 水平.常見(jiàn)用于標記的酶有辣 根過(guò)氧化物酶(HRP)、堿性磷酸酶(AP)等.由于酶聯(lián)免疫法無(wú)需特殊的儀器,檢測簡(jiǎn)單,因此被廣泛應用于疾病檢測.常用的方法有間接法、夾心法以及BAS -ELISA.間接法是先將待測的蛋白抱被在孔板內,然后依次加入一抗、標記了 酶的二抗和底物顯色,通過(guò)儀器(例如酶標儀)定量檢測抗原.這種方法操作簡(jiǎn) 單但由于高背景而特異性較差.目前已逐漸被夾心法取代.夾心法利用二種一抗 對目標抗原進(jìn)行捕獲和固定,在確保靈敏度的同時(shí)大大提高了反應的特異性.近 年來(lái),抗原的定量檢測技術(shù)也不斷推陳出新.近年來(lái),在夾心法ELISA 的基礎上,開(kāi)發(fā)了多抗原檢測試劑盒,能同時(shí)檢測微量液相樣本中多個(gè)抗原含量.這項技術(shù) 的應用大大縮短了診斷的時(shí)間,提高診斷的可靠性和及時(shí)性.4.免疫金膠體技術(shù) 膠體金技術(shù)經(jīng)過(guò)30 多年的發(fā)展到現在已日趨成熟,該方法是將二抗標記上 膠體金顆粒,利用抗原抗體間的特異性反應,最終將膠體金標記的二抗吸附于滲 濾膜上,此方法簡(jiǎn)單,快速,廣泛應用于臨床篩查.。
研究方法,一般包括文獻調查法、觀(guān)察法、文獻研究法、跨學(xué)科研究法、個(gè)案研究法等等。
1、調查法
調查法是科學(xué)研究中最常用的方法之一。調查法中最常用的是問(wèn)卷調查法,它是以書(shū)面提出問(wèn)題的方式搜集資料的一種研究方法,即調查者就調查項目編制成表式,分發(fā)或郵寄給有關(guān)人員,請示填寫(xiě)答案,然后回收整理、統計和研究。
2、觀(guān)察法
觀(guān)察法是指研究者根據一定的研究目的、研究提綱或觀(guān)察表,用自己的感官和輔助工具去直接觀(guān)察被研究對象,從而獲得資料的一種方法。科學(xué)的觀(guān)察具有目的性和計劃性、系統性和可重復性。
3、文獻研究法
文獻研究法是根據一定的研究目的或課題,通過(guò)調查文獻來(lái)獲得資料,從而全面地、正確地了解掌握所要研究問(wèn)題的一種方法。文獻研究法被廣泛用于各種學(xué)科研究中。
4、跨學(xué)科研究法
運用多學(xué)科的理論、方法和成果從整體上對某一課題進(jìn)行綜合研究的方法,也稱(chēng)“交叉研究法”。科學(xué)發(fā)展運動(dòng)的規律表明,科學(xué)在高度分化中又高度綜合,形成一個(gè)統一的整體。
據有關(guān)專(zhuān)家統計,現在世界上有2000多種學(xué)科,而學(xué)科分化的趨勢還在加劇,但同時(shí)各學(xué)科間的聯(lián)系愈來(lái)愈緊密,在語(yǔ)言、方法和某些概念方面,有日益統一化的趨勢。
5、個(gè)案研究法
個(gè)案研究法是認定研究對象中的某一特定對象,加以調查分析,弄清其特點(diǎn)及其形成過(guò)程的一種研究方法。
參考資料來(lái)源:搜狗百科——研究方法
應用免疫學(xué)的理論、技術(shù)和方法診斷各種疾病和測定免疫狀態(tài)。
在醫學(xué)上,它是確定疾病的病因和病變部位,或是確定機體免疫狀態(tài)是否正常的重要方法。此外,還應用于法醫學(xué)的血跡鑒定、生物化學(xué)的血清成分鑒定和物種進(jìn)化關(guān)系的研究等。
可在體內和體外進(jìn)行。從免疫學(xué)的角度免疫診斷可應用于:(1)檢查免疫器官和功能發(fā)生改變的疾病:如免疫缺陷病、自身免疫病。
(2)由免疫機制引起的疾病:如輸血反應、移植排斥反應。(3)一些內分泌性的疾病:從臨床學(xué)的角度來(lái)說(shuō),免疫診斷可應用于檢查傳染性疾病、免疫性疾病、腫瘤和其他臨床各科疾病。
就所檢測的反應物免疫診斷大致可以分為兩類(lèi),即:(1)免疫血清學(xué)診斷:檢測病人血清或組織內有無(wú)特異性抗體或特異性抗原。(2)免疫細胞學(xué)診斷:測定病人細胞免疫力的有無(wú)和強弱。
免疫診斷須體現3項要求:(1)特異性強,盡量不出現交叉反應,不出現假陽(yáng)性,以保證診斷的準確性。(2)靈敏度高,能測出微量反應物質(zhì)和輕微的異常變化,有利于早期診斷和排除可疑病例。
(3)簡(jiǎn)便、快速、安全。
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