誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法(4誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法)
1.4、誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有哪些
(1)物理融合的機(jī)制
20世紀(jì)80年代發(fā)明了電融合技術(shù)。此方法是先將兩種原生質(zhì)體以適當(dāng)?shù)谋壤瞥杉?xì)胞懸液，將其滴入電融合小室中，給小室兩極以交變電流，使原生質(zhì)體沿電場方向聚集成串珠狀，接著給以瞬間高強(qiáng)度的電脈沖，使原生質(zhì)體膜產(chǎn)生局部破損而融合。
(2)化學(xué)融合的機(jī)制
現(xiàn)通常使用聚乙二醇（PEG）作為融合劑。PEG可以破環(huán)細(xì)胞間相互排斥的表面作用力，從而使相鄰細(xì)胞聚集而促進(jìn)融合。另外，化學(xué)融合方法還有高pH高Ca2+法，其基本原理是中和原生質(zhì)體表面所帶電荷，使原生質(zhì)體的質(zhì)膜緊密接觸，從而有利于質(zhì)膜的接觸融合。
(3)滅火病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞融合的機(jī)制
此方法適用于動物細(xì)胞的融合。通常使用滅火的仙臺病毒。利用滅火的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)重新排布，細(xì)胞膜打開，細(xì)胞發(fā)生融合。在誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生融合前，必須先用紫外線將病毒滅火，再稀釋到一定濃度后加入到細(xì)胞懸液中誘導(dǎo)細(xì)胞融合。
2.動物細(xì)胞融合的方法
還有：震動，病毒。
誘導(dǎo)細(xì)胞融合的方法有三種：生物方法（病毒）、化學(xué)方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（離心，震動，電刺激）。某些病毒如：仙臺病毒、副流感病毒和新城雞瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介導(dǎo)病毒同宿主細(xì)胞融合，也可介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞的融合，因此可以用紫外線滅活的此類病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合?；瘜W(xué)和物理方法可造成膜脂分子排列的改變，去掉作用因素之后，質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)，在恢復(fù)過程中便可誘導(dǎo)相接觸的細(xì)胞發(fā)生融合。
培養(yǎng)基的差異：動物細(xì)胞的培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基、血清培養(yǎng)基，而植物培養(yǎng)基是固體培養(yǎng)基。
以下是動物培養(yǎng)基和植物培養(yǎng)基的具體內(nèi)容：
動物培養(yǎng)基：
1.動物細(xì)胞培養(yǎng)液的成分：葡萄糖、氨基酸、無機(jī)鹽、維生素和動物血清等。動物細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵在于培養(yǎng)液中是否含有動物血清，因?yàn)橛捎趧游锛?xì)胞生活的內(nèi)環(huán)境還有一些成分尚未研究清楚，所以需要加入動物血清以提供一個(gè)類似生物體內(nèi)的環(huán)境，此外動物血清中也包含了一些動物的激素和酶，可以促進(jìn)細(xì)胞的發(fā)育。
2.動物細(xì)胞培養(yǎng)液的特點(diǎn)：液體培養(yǎng)基、含動物血清。
植物培養(yǎng)基：
( 1 )愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基： MS 培養(yǎng)基（蔗糖含量為 10 g/L , 2,4 – D 含量為 2 mg/L ，瓊脂 10 g/L ）。
( 2 )試驗(yàn)培養(yǎng)基：在 MS 培養(yǎng)基中加入 IAA 和 6–BA 。
吲哚乙酸（IAA）先用少量 0.1 mol/L NaOH 溶解， 6- 芐基氨基腺嘌呤先用少量 0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸餾水稀釋，再加入培養(yǎng)基中。
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3.可以誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合的方法有（ ）A.加有機(jī)溶劑B.使用病毒C.使用電
有性繁殖時(shí)發(fā)生的精卵結(jié)合是正常的細(xì)胞融合，即由兩個(gè)配子融合形成一個(gè)新的二倍體.在自然條件下或用人工方法（生物的、物理的、化學(xué)的）使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的過程.人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合，在六十年代作為一門新興技術(shù)而發(fā)展起來.由于它不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域. 基因型相同的細(xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱為同核體；來自不同基因型的雜交細(xì)胞則稱為異核體.細(xì)胞融合的具體步驟包括：（1）細(xì)胞準(zhǔn)備，分貼壁和懸浮細(xì)胞兩種.前者可直接將兩親本細(xì)胞混合培養(yǎng)，后者需制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液.（2）細(xì)胞融合，加促融因子于將行融合的細(xì)胞之中，誘導(dǎo)融合.（3）雜種細(xì)胞選擇.利用選擇性培養(yǎng)基等，使親本細(xì)胞死亡，而讓雜種細(xì)胞存活.（4）雜種細(xì)胞克隆.對選出的雜種細(xì)胞進(jìn)行克隆（選擇與純化），經(jīng)過培養(yǎng)，就能獲得所需要的無性繁殖系.故選；BC.。
