飼料抗生素檢測(cè)方法(目前抗生素的含量測(cè)定多用什么方法)
1.目前抗生素的含量測(cè)定多用什么方法
牛奶中抗生素殘留的幾種常用檢測(cè)方法 隨著奶牛飼養(yǎng)業(yè)的發(fā)展，抗生素在預(yù)防和治療奶牛疾病方面得到廣泛的應(yīng)用。
生鮮牛奶中抗生素的來(lái)源主要是：第一，治療泌乳期病牛時(shí)使用的抗生素會(huì)從奶牛體內(nèi)移行到乳腺殘留進(jìn)入牛奶中，資料表明治療后的奶牛，其擠出的牛奶5天內(nèi)都有抗生素殘留；其二，為了預(yù)防奶牛疾病并提高產(chǎn)量，在奶牛飼料中添加抗生素也會(huì)造成牛奶中抗生素的殘留；第三，由于牧場(chǎng)管理不善，擠奶、儲(chǔ)奶沒(méi)有嚴(yán)格的衛(wèi)生制度和配套的設(shè)施，人為添加或造成牛奶抗生素的污染。牛奶中含有抗生素，不僅對(duì)人的健康造成很大的危害，而且對(duì)乳品加工企業(yè)帶來(lái)經(jīng)濟(jì)損失（因無(wú)法生成酸奶和奶酪）。
因此必須嚴(yán)格控制牛奶中抗生素殘留，除了要做好科學(xué)飼養(yǎng)、精心管理；正確擠奶和預(yù)防疾病外，還要規(guī)范抗生素的使用，按國(guó)標(biāo)中有關(guān)規(guī)定，用藥后的奶牛5天后所產(chǎn)的牛奶才可作為原料乳，并且要檢測(cè)其殘留。世界糧農(nóng)組織（FAO）、世界衛(wèi)生組織（WHO）、歐盟（EC）及美國(guó)的食品和藥品管理局（FDA）等對(duì)食品中抗生素最大殘留量都有明確的規(guī)定，我國(guó)也有鮮奶中抗生素殘留量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)（GB4689.27—94）。
目前，鮮奶中抗生素殘留的檢測(cè)方法大致分為三類：生物測(cè)定法（微生物測(cè)定法、放射受體測(cè)定法）、免疫法（放射免疫法、熒光免疫法、酶聯(lián)免疫法）、理化分析法（波譜法、色譜及聯(lián)用技術(shù)）。下面介紹幾種常用的牛奶中抗生素殘留檢測(cè)方法。
TTC法TTC法是我國(guó)鮮奶中抗生素殘留量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)（GB4689.27—94）的檢測(cè)法，屬生物檢測(cè)法。其測(cè)定原理基于抗生素對(duì)微生物的抑制作用。
如果牛奶中含有抗生素，則加入菌種（嗜熱鏈球菌）經(jīng)培育2.5~3小時(shí)后，加入TTC指示劑（三苯基四氮唑）不發(fā)生還原反應(yīng)，所以樣品呈無(wú)色狀態(tài)；如果牛奶中不含抗生素，則樣品呈紅色.這樣實(shí)驗(yàn)后樣品顏色不變的為陽(yáng)性，樣品染成紅色的為陰性。TTC法的具體操作步驟：1.菌液制備：將單菌種（嗜熱鏈球菌）以脫脂乳為培養(yǎng)基，在36±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)15小時(shí)后，再以脫脂乳以至于1:1稀釋待用；2.取待檢樣液9mL，在80℃水浴加熱5分鐘后冷卻到37℃以下，加活菌液1mL，在36℃±1℃水浴2小時(shí)，加入4%的TTC指示劑0.3mL, 36℃±1℃水浴培養(yǎng)30分鐘；3.若樣液顏色不變?yōu)殛?yáng)性，呈紅色為陰性；若陽(yáng)性的樣液，再置于水浴中培養(yǎng)30分鐘，不顯色的為陽(yáng)性，呈紅色為陰性.TTC法測(cè)定各種抗生素的靈敏度為：青霉素：4ppb，鏈霉素：500ppb，慶大霉素：400ppb，卡那霉素：5000ppb.它具有費(fèi)用低，易開(kāi)展的優(yōu)點(diǎn)；缺點(diǎn)是耗時(shí)長(zhǎng)，要求操作人員需有一定專業(yè)知識(shí)且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中菌液的制備、水浴過(guò)程控制都要求嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，否則易出現(xiàn)假陽(yáng)性，以致出現(xiàn)檢驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定性。
Delvotest? sp法（戴爾沃檢測(cè)法）該法最早在香港傳到廣東的，其使用是基于20世紀(jì)80年代初香港要求廣東出口的生奶必須“無(wú)抗”且要求采用Delvotest法檢測(cè)。該方法也是生物測(cè)定法，其試劑是由荷蘭DSM公司生產(chǎn)并由AOAC認(rèn)證。
原理是利用微生物—嗜熱芽胞菌在64℃條件下培養(yǎng)2.5~3小時(shí)后會(huì)產(chǎn)酸，酸引起指示劑BCP（溴甲酚紫）變?yōu)辄S色；若牛奶樣品中不含抗生素，培養(yǎng)后樣品呈黃色，如樣品中含有抗生素， 嗜熱芽胞菌生長(zhǎng)受到抑制而無(wú)法產(chǎn)酸，指示劑將不變色.Delvotest? sp 法的操作步驟：1.以無(wú)菌操作將一片營(yíng)養(yǎng)藥片夾放入小試管內(nèi)；2.用微量移液管將0.1mL牛奶樣品注入小試管內(nèi)；3.把小試管放入已預(yù)熱至64℃的水浴箱或恒溫器中培養(yǎng)；4）.定時(shí)3小時(shí)取出觀察顏色變化.如果底部2/3的固體介質(zhì)是黃色，則為陰性， 如果底部2/3的固體介質(zhì)是紫色，則為陽(yáng)性.Delvotest? sp 法具有廣譜性，可檢測(cè)到？-內(nèi)酰胺類抗生素在內(nèi)的更多抗生素，如磺胺類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氨基糖苷類、氯霉素等，其中對(duì)青霉素和磺胺類抗生素特別靈敏. 其靈敏度為：青霉素：3ppb，鏈霉素：300ppb，慶大霉素：400ppb，卡那霉素：2500ppb。Delvotest? sp 法集操作方便，嚴(yán)格實(shí)用，容易判斷，結(jié)果可靠，費(fèi)用適中等優(yōu)點(diǎn)；但也易出現(xiàn)假陽(yáng)性，實(shí)驗(yàn)證明：當(dāng)牛奶樣品中添加微生物防腐劑（如乳酸鏈球菌素—Nisn）或樣品中有足夠的洗滌劑殘留時(shí)，便可影響嗜熱芽胞菌生長(zhǎng)而使實(shí)驗(yàn)為陽(yáng)性。
Snap？法該方法是酶聯(lián)免疫法，由美國(guó)IDEXX公司生產(chǎn)其檢測(cè)分析儀及其試劑盒，均獲得AOAC認(rèn)證，它利用了竟?fàn)幟嘎?lián)免疫技術(shù)。其基本原理是用特異性抗體將固相載體激活，加入含待測(cè)抗原的溶液和一定量的酶標(biāo)記抗原在45℃±5℃共同保溫，使樣品內(nèi)的抗生素與內(nèi)置抗生素標(biāo)志物竟?fàn)幣c固定的抗體結(jié)合，然后進(jìn)行洗滌和顯色，內(nèi)置抗生素標(biāo)志物與固定的抗體結(jié)合形成的復(fù)合體，通過(guò)酶的作用分解可形成有色物質(zhì)，通過(guò)測(cè)定色度并與參照物對(duì)照，就可以確定結(jié)果是陽(yáng)性或陰性。
Snap？法操作步驟：1.加入乳樣于樣品管中，搖勻，加熱樣品和檢測(cè)板5分鐘；2.加入乳樣于樣品孔中，當(dāng)激活圓環(huán)開(kāi)始退卻時(shí)，按Snap鍵；3.反應(yīng)4分鐘，由Snap？讀數(shù)儀讀取并打印結(jié)果.檢測(cè)讀數(shù)小于1.05時(shí)判為陰性，大于1.05時(shí)判為陽(yáng)性.Snap？法是一種將酶化學(xué)反應(yīng)的敏感性和抗原抗體免疫反應(yīng)的特異性相結(jié)合的方法，其敏。
2.飼料的檢測(cè)項(xiàng)目有哪些
飼料檢測(cè)項(xiàng)目一覽表 常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目氨基酸檢測(cè)□ 粗蛋白 □ 18種水解蛋白質(zhì)氨基酸的測(cè)定□ 粗脂肪 維生素檢測(cè)項(xiàng)目□ 粗纖維 □ 維生素A□ 水分 □ 維生素E□ 鈣 □ 維生素D3□ 總磷 □ 維生素B1□ 粗灰分 □ 維生素B2□ 水溶性氯化物 □ 總抗壞血酸 □ 胃蛋白酶消化率 □ 維生素B6□ 熱量 □ 維生素B12微量元素檢測(cè)項(xiàng)目□ 煙酸 □ 鉀 □ 泛酸 □ 鈉 □ 葉酸 □ 鈣 □ d-生物素 □ 鎂 □ 銅 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 配合飼料檢測(cè)項(xiàng)目□ 鐵 □ 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定 □ 錳 □ 氨基酸的測(cè)定 □ 鋅 □ 維生素的測(cè)定 □ 硒 □ 礦物質(zhì)和微量元素的測(cè)定。
3.豬飼料國(guó)家允許添加的抗生素有哪些
多肽類抗生素如：硫酸粘桿菌素 恩拉霉素 維吉尼霉素 阿伏霉素 硫肽菌素 。
大環(huán)內(nèi)酯類抗生素如： 泰樂(lè)菌素 北里霉素 螺旋霉素 紅霉素 竹桃霉素。
聚醚類抗生素如：拉沙洛西鈉 莫能霉素 鹽霉素鈉。
四環(huán)素類抗生素：如土霉素 金霉素。
合成抗生素及其相關(guān)藥物： 胂制劑 銅制劑 鋅制劑 喹乙醇 卡巴氧 痢特靈 磺胺藥
多糖類抗生素：黃霉素
其它幾種抗生素促生長(zhǎng)劑：阿布拉霉素 卑霉素 桿菌肽鋅
4.根據(jù)檢測(cè)原理不同,食品中抗生素殘留的檢測(cè)方法可分為哪幾種
目前應(yīng)用于食品中抗生素殘留的檢測(cè)方法依據(jù)檢測(cè)原理的不同主要有：微生物檢測(cè)法、理化檢測(cè)法和免疫分析法。
1、微生物檢測(cè)法
抗生素對(duì)微生物機(jī)能和代謝具有抑制作用，利用該性質(zhì)可實(shí)現(xiàn)對(duì)樣品中抗生素殘留的定性或定量分析，而且檢測(cè)費(fèi)用較低，但是花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)、特異性差、靈敏度低、對(duì)微量殘留檢測(cè)易產(chǎn)生誤差。
2、理化檢測(cè)法
理化檢測(cè)法是一種根據(jù)抗生素的分子理化性質(zhì)對(duì)其進(jìn)行分離和檢測(cè)的方法，如色譜法（高效液相色譜法、氣相色譜法、質(zhì)譜法等）、電泳法（毛細(xì)管電泳法等），這種方法檢測(cè)靈敏度較高、結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好、精確可靠，是目前食品中抗生素殘留測(cè)定的確證檢測(cè)方法，但是為了減少背景干擾樣品前處理方法復(fù)雜，分析速度慢，分析儀器昂貴，需要專業(yè)的操作人員等缺點(diǎn)限制了該方法的普遍推廣應(yīng)用。
3、免疫分析法
免疫分析法是以抗原與抗體的特異性結(jié)合為基礎(chǔ)的分析技術(shù)，雖然成本較其他方法高，但是具有操作簡(jiǎn)單、取樣量少、前處理簡(jiǎn)單、檢測(cè)快速、特異性強(qiáng)、靈敏度高、可同時(shí)檢測(cè)樣品中多種抗生素殘留、可實(shí)現(xiàn)大規(guī)模的檢測(cè)及容易推廣普及等優(yōu)點(diǎn)，是一種理想的抗生素殘留的檢測(cè)方法。其中，基于量子點(diǎn)（quantum qots,QDs）的熒光免疫分析方法應(yīng)用更為廣泛。QDs作為熒光標(biāo)記相對(duì)于傳統(tǒng)熒光染料有如下優(yōu)點(diǎn)：熒光強(qiáng)度高，抗光漂白性能好，斯托克斯位移較大，可通過(guò)控制粒徑改變熒光發(fā)射波長(zhǎng)，能夠?qū)崿F(xiàn)“一元激發(fā)多元發(fā)射”等。這些優(yōu)勢(shì)使得QDs在熒光標(biāo)記中的應(yīng)用日益廣泛。用QDs對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記，通過(guò)抗原直接包被法或間接競(jìng)爭(zhēng)法兩種免疫方法實(shí)現(xiàn)食品中抗生素殘留的檢測(cè)。Ding Shuangyang等，直接獲得商品化的QD655-羊抗鼠IgG，然后通過(guò)羊抗鼠IgG與抗體的作用得到QDs-抗體探針，分別實(shí)現(xiàn)了對(duì)磺胺二甲嘧啶和恩諾沙星在雞肉組織中的檢測(cè)。除此之外，由于QDs的能夠?qū)崿F(xiàn)“一元激發(fā)多元發(fā)射”的熒光特性，還可以用于多種抗生素的同時(shí)檢測(cè)。Peng Chifang等采用五種不同發(fā)射波長(zhǎng)的QDs分別標(biāo)記五種不同的抗體，通過(guò)間接競(jìng)爭(zhēng)熒光免疫分析法（ic-FLISA）實(shí)現(xiàn)了同一樣品中五種抗生素殘留的同時(shí)檢測(cè)。Zhu Kui等[7]用兩種發(fā)射波長(zhǎng)的QDs，通過(guò)直接競(jìng)爭(zhēng)（QDs標(biāo)記一抗）和間接競(jìng)爭(zhēng)（QDs-二抗-一抗或QDs-親和素-生物素-一抗）兩種方法實(shí)現(xiàn)對(duì)磺胺類和喹諾酮類抗生素在牛奶中殘留的檢測(cè)，并在同一牛奶樣品中與酶聯(lián)免疫分析（ELISA）聯(lián)用，用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記，實(shí)現(xiàn)三聚氰胺的同時(shí)檢測(cè)（HRP-二抗-一抗）。采用以量子點(diǎn)為標(biāo)記的熒光免疫法檢測(cè)食品中的抗生素殘留是一種高效、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)單、快速的檢測(cè)方法。
5.飼料廠如何鑒別各種藥物的品質(zhì),抗菌能力
藥敏試驗(yàn)的建議實(shí)在是離譜了。
很多學(xué)校都沒(méi)有條件做，不說(shuō)設(shè)備，就是定型的菌種你都找不全。 那只是幫助分析某種藥物，對(duì)指定細(xì)菌的作用。
實(shí)際的生產(chǎn)，只要抗生素用上能殺菌，成本合適，無(wú)不良副作用就好了呀。 一般而言，哪怕是美國(guó)的usp和歐洲的ep標(biāo)準(zhǔn)，包括我們國(guó)家的藥典。
對(duì)于藥物的評(píng)價(jià)除了一般的指標(biāo)（失水重、灼燒殘?jiān)?、重金屬等?對(duì)于含量主要兩個(gè)方法： 1 HPLC，這個(gè)不需要說(shuō)了，比較常見(jiàn)的方法，只要有標(biāo)準(zhǔn)品，掌握操作方法，應(yīng)該還好的。 2 生測(cè)法，用藥典規(guī)定的菌種檢驗(yàn)藥物的抗菌力，得到的是“效價(jià)”，一般是日本人發(fā)現(xiàn)得抗生素用的比較多。
硫酸粘桿菌素、硫酸新霉素等等~~~ 我們和客戶的交流中，很多客戶只認(rèn)HPLC也很讓人郁悶。畢竟，個(gè)人覺(jué)得，生測(cè)法是反映實(shí)際效果的。
即便藥典不是很完美，可如果藥典的方法都被否定了，真的不知道還有什么標(biāo)準(zhǔn)可以參考。 另外，很多朋友質(zhì)疑國(guó)內(nèi)的抗生素廠家。
這點(diǎn)完全可以放心，目前大家能用到的抗生素，都是可以國(guó)產(chǎn)化的。 中國(guó)的仿造能力可是世界一流，這個(gè)你不承認(rèn)？ 但凡中國(guó)能生產(chǎn)的，基本國(guó)外公司全掛掉。
這個(gè)你也承認(rèn)吧？ 建議大家選擇知名大廠，比如升華拜克。 知名的抗生素大廠，都是出口世界各地的，經(jīng)過(guò)世界最嚴(yán)格的質(zhì)量體系約束，也備受世界大公司審查。
他們的質(zhì)量是完全可以放心的。
