(1)物理融合的機(jī)制
20世紀(jì)80年代發(fā)明了電融合技術(shù)。此方法是先將兩種原生質(zhì)體以適當(dāng)?shù)谋壤瞥杉?xì)胞懸液,將其滴入電融合小室中,給小室兩極以交變電流,使原生質(zhì)體沿電場(chǎng)方向聚集成串珠狀,接著給以瞬間高強(qiáng)度的電脈沖,使原生質(zhì)體膜產(chǎn)生局部破損而融合。
(2)化學(xué)融合的機(jī)制
現(xiàn)通常使用聚乙二醇(PEG)作為融合劑。PEG可以破環(huán)細(xì)胞間相互排斥的表面作用力,從而使相鄰細(xì)胞聚集而促進(jìn)融合。另外,化學(xué)融合方法還有高pH高Ca2+法,其基本原理是中和原生質(zhì)體表面所帶電荷,使原生質(zhì)體的質(zhì)膜緊密接觸,從而有利于質(zhì)膜的接觸融合。
(3)滅火病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞融合的機(jī)制
此方法適用于動(dòng)物細(xì)胞的融合。通常使用滅火的仙臺(tái)病毒。利用滅火的病毒能使細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)重新排布,細(xì)胞膜打開(kāi),細(xì)胞發(fā)生融合。在誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生融合前,必須先用紫外線(xiàn)將病毒滅火,再稀釋到一定濃度后加入到細(xì)胞懸液中誘導(dǎo)細(xì)胞融合。
有性繁殖時(shí)發(fā)生的精卵結(jié)合是正常的細(xì)胞融合,即由兩個(gè)配子融合形成一個(gè)新的二倍體.在自然條件下或用人工方法(生物的、物理的、化學(xué)的)使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程.人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合,在六十年代作為一門(mén)新興技術(shù)而發(fā)展起來(lái).由于它不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合,也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合,因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域. 基因型相同的細(xì)胞融合成的雜交細(xì)胞稱(chēng)為同核體;來(lái)自不同基因型的雜交細(xì)胞則稱(chēng)為異核體.細(xì)胞融合的具體步驟包括:(1)細(xì)胞準(zhǔn)備,分貼壁和懸浮細(xì)胞兩種.前者可直接將兩親本細(xì)胞混合培養(yǎng),后者需制成一定濃度的細(xì)胞懸浮液.(2)細(xì)胞融合,加促融因子于將行融合的細(xì)胞之中,誘導(dǎo)融合.(3)雜種細(xì)胞選擇.利用選擇性培養(yǎng)基等,使親本細(xì)胞死亡,而讓雜種細(xì)胞存活.(4)雜種細(xì)胞克隆.對(duì)選出的雜種細(xì)胞進(jìn)行克隆(選擇與純化),經(jīng)過(guò)培養(yǎng),就能獲得所需要的無(wú)性繁殖系.故選;BC.。
細(xì)胞膜打開(kāi)。
化學(xué)和物理方法可造成膜脂分子排列的改變: 病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用, 但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)
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這里的病毒肯定不會(huì)死亡的, 細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布, 細(xì)胞發(fā)生融合,在恢復(fù)過(guò)程中便可誘導(dǎo)相接觸的細(xì)胞發(fā)生融合.,去掉作用因素之后.
滅活是指用物理或化學(xué)手段使病毒或細(xì)菌失去感染能力.,稱(chēng)誘發(fā)融合..只是滅活, 但是保留了他能夠使細(xì)胞融合的特性.
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異種間的細(xì)胞必須經(jīng)誘導(dǎo)劑處理才能融合,質(zhì)膜恢復(fù)原有的有序結(jié)構(gòu)滅活病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理是, 使細(xì)胞相互凝聚
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