細(xì)菌純培養(yǎng)方法(細(xì)菌培養(yǎng)的方法)
1.細(xì)菌培養(yǎng)的方法有哪些
根據(jù)培養(yǎng)細(xì)菌的目的和培養(yǎng)物的特性培養(yǎng)方法分為一般培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法三種。
1、一般培養(yǎng)法：將已接種過(guò)的培養(yǎng)基，置37℃培養(yǎng)箱內(nèi)18-24小時(shí)，需氧菌和兼性厭氧菌即可于培養(yǎng)基上生長(zhǎng)。少數(shù)生長(zhǎng)緩慢的細(xì)菌，需培養(yǎng)3-7天直至一個(gè)月才能生長(zhǎng)。
為使培養(yǎng)箱內(nèi)保持一定濕度，可在其內(nèi)放置一杯水。培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口塞棉塞后用石臘凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂。
2、二氧化碳培養(yǎng)法：某些細(xì)菌，如牛流產(chǎn)布氏桿菌和胎兒弧菌等需要在含有10%二氧化碳的空氣中才能生長(zhǎng)，尤其是初代分離培養(yǎng)要求更為嚴(yán)格。將已接種的培養(yǎng)基置于二氧化碳環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)的方法即二氧化碳培養(yǎng)法，
3、厭氧培養(yǎng)法：常用的厭氧培養(yǎng)方法有厭氧罐法、氣袋法及厭氧箱三種。
擴(kuò)展資料：
培養(yǎng)時(shí)應(yīng)根據(jù)細(xì)菌種類和目的等選擇培養(yǎng)方法、培養(yǎng)基，制定培養(yǎng)條件（溫度、pH值、時(shí)間，對(duì)氧的需求與否等）。
一般操作步驟為先將標(biāo)本接種于固體培養(yǎng)基上，做分離培養(yǎng)。再進(jìn)一步對(duì)所得單個(gè)菌落進(jìn)行形態(tài)、生化及血清學(xué)反應(yīng)鑒定。培養(yǎng)基常用牛肉湯、蛋白胨、氯化鈉、葡萄糖、血液等和某些細(xì)菌所需的特殊物質(zhì)配制成液體、半固體、固體等。
一般細(xì)菌可在有氧條件下，37℃中放18~24小時(shí)生長(zhǎng)。厭氧菌則需在無(wú)氧環(huán)境中放2~3天后生長(zhǎng)。個(gè)別細(xì)菌如結(jié)核菌要培養(yǎng)1個(gè)月之久。
通過(guò)日常管理、檢測(cè)、檢查，了解光合細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，就可以結(jié)合當(dāng)時(shí)環(huán)境條件的變化進(jìn)行分析，找出影響光合細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的原因，采取相應(yīng)的措施。影響光合細(xì)菌生長(zhǎng)的原因很多，內(nèi)因是菌種是否優(yōu)良，外因是光照、溫度、營(yíng)養(yǎng)、敵害和厭氣程度等。
溫度、光照和pH值都能影響著光合細(xì)菌的生長(zhǎng)，而且溫度、光照和pH值之間是互相制約的，溫度與光照的強(qiáng)弱是對(duì)立統(tǒng)一的，所以光合細(xì)菌生長(zhǎng)的最適條件應(yīng)是互應(yīng)的，即溫度高，光照應(yīng)弱；溫度低，光照應(yīng)強(qiáng)。
如果是溫度高，光照強(qiáng)，pH值就會(huì)迅速升高，培養(yǎng)基產(chǎn)生沉淀，抑制光臺(tái)細(xì)菌的生長(zhǎng)；如果溫度低，光照弱，光合細(xì)菌得不到最佳能源，生長(zhǎng)速度也慢。經(jīng)試驗(yàn)得出光合細(xì)菌生長(zhǎng)的最適條件是：
①溫度15~20℃時(shí)，光照30000~50000lx，培養(yǎng)基pH值為7.0;
②溫度25~30℃時(shí)，光照為3000~5000lx，培養(yǎng)基的pH值為7.0。
參考資料來(lái)源：搜狗百科——細(xì)菌培養(yǎng)
2.獲得微生物純培養(yǎng)的方法及特點(diǎn)
一、固體培養(yǎng)基分離
1、稀釋倒平板
特點(diǎn)：菌落分離較為均勻，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確。但操作相對(duì)麻煩，熱敏感菌有時(shí)易被燙死，而嚴(yán)格好氧菌也可能因被固定在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)受到影響。
2、涂布平板法
特點(diǎn)：操作相對(duì)簡(jiǎn)單，是較常使用的常規(guī)方法。但有時(shí)會(huì)因涂布不均勻使某些部位的菌落不能分開(kāi)，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)需對(duì)稀釋和涂布過(guò)程的操作特別注意，否則不易得到準(zhǔn)確的結(jié)果。
3、平板劃線法
特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，多用于對(duì)已有純培養(yǎng)的確認(rèn)和再次分離。
應(yīng)用：這三種方法可用于所有能在固體培養(yǎng)基表面形成菌落的微生物的純培養(yǎng)分離。并且，通過(guò)選用適當(dāng)?shù)倪x擇平板及培養(yǎng)條件，可直接分離各種具有特定生理特征的微生物。和厭氧罐或厭氧手套箱技術(shù)結(jié)合，這3種方法也可用于獲得各種厭氧菌的純培養(yǎng)。
4、稀釋搖管法
特點(diǎn)：稀釋倒平板法的一種變通形式，但由于菌落形成在瓊脂柱的中間，觀察和挑取都相對(duì)困難。
應(yīng)用：在缺乏專業(yè)的厭氧操作設(shè)備的情況下對(duì)嚴(yán)格厭氧菌進(jìn)行分離和觀察。
二、液體培養(yǎng)基分離
1、稀釋法
特點(diǎn)：工作量大，是否獲得純培養(yǎng)需依靠統(tǒng)計(jì)學(xué)的推測(cè)。
應(yīng)用：不能或不易在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物進(jìn)行純培養(yǎng)分離或數(shù)量統(tǒng)計(jì)。
2、富集培養(yǎng)
特點(diǎn)：一般不能直接獲得微生物的純培養(yǎng)，在通過(guò)富集培養(yǎng)使原本在自然環(huán)境中占少數(shù)的微生物的數(shù)量大大提高后，需再通過(guò)平板法進(jìn)行相應(yīng)微生物純培養(yǎng)的分離和檢測(cè)。
應(yīng)用：
(1)根據(jù)某種微生物的特殊生長(zhǎng)要求，按照意愿從自然界中對(duì)這種微生物進(jìn)行有針對(duì)性的有效分離；
(2)分離培養(yǎng)出由科學(xué)家設(shè)計(jì)的特定環(huán)境中能生長(zhǎng)的微生物，盡管我們并不知道什么微生物能在這種特定的環(huán)境中生長(zhǎng)。
三、顯微操作
單細(xì)胞（孢子）挑取
特點(diǎn)：分離過(guò)程直觀，可靠，但對(duì)儀器和操作技術(shù)要求較高，多限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究。而挑取的微生物單細(xì)胞或孢子需經(jīng)固體或液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后才能獲得其純培養(yǎng)物。
應(yīng)用：從樣品中直接分離所需的微生物細(xì)胞或孢子，獲得其純培養(yǎng)。
3.微生物分離和純培養(yǎng)技術(shù)有哪些
微生物的培養(yǎng)方式
1.分批培養(yǎng)（batchculture）將微生物置于一定容積的培養(yǎng)基中，經(jīng)培養(yǎng)，最后一次收獲，謂分批培養(yǎng)。在分批培養(yǎng)中，培養(yǎng)基一次加入，不予補(bǔ)充，不再更換。由于營(yíng)養(yǎng)消耗，代謝產(chǎn)物積累，對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期不能長(zhǎng)期維持。
2.連續(xù)培養(yǎng)（continuous culture）在培養(yǎng)器中不斷補(bǔ)充新鮮營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并不斷排出部分培養(yǎng)物（包括菌體和代謝產(chǎn)物），以保持長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)狀態(tài)的一種培養(yǎng)方式。主要有恒濁連續(xù)培養(yǎng)和恒化連續(xù)培養(yǎng)兩類。恒濁連續(xù)培養(yǎng)通過(guò)不斷調(diào)節(jié)流速，使培養(yǎng)液濁度保持恒定，因而可不斷提供具有一定生理狀態(tài)的細(xì)胞，并可得到以最高生長(zhǎng)速率進(jìn)行生長(zhǎng)的培養(yǎng)物。恒化連續(xù)培養(yǎng)通過(guò)控制恒定的流速使?fàn)I養(yǎng)物濃度基本恒定，從而使微生物保持恒定的生長(zhǎng)速率。用不同濃度的限制性營(yíng)養(yǎng)物進(jìn)行恒化培養(yǎng)，可得到不同生長(zhǎng)速率的培養(yǎng)物。
3.半連續(xù)培養(yǎng)（semi-continuous culture）在發(fā)酵罐中的一部分發(fā)酵液保留下來(lái)作為菌種液，放出其余部分進(jìn)入提練加工工序，在剩余的培養(yǎng)液中加滿新的未接種的培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，如此反復(fù)，謂之半連續(xù)培養(yǎng)。
4.補(bǔ)料分批培養(yǎng)（fed-batch culture）補(bǔ)料分批培養(yǎng)又稱半分批培養(yǎng)，是指在分批培養(yǎng)過(guò)程中，間歇或連續(xù)地補(bǔ)加新鮮培養(yǎng)液，但不取出培養(yǎng)物。待培養(yǎng)到適當(dāng)時(shí)期，將其從反應(yīng)器中放出，從中提取目的生成物（菌體或代謝產(chǎn)物）。若放出大部分培養(yǎng)物后，繼續(xù)進(jìn)行補(bǔ)料培養(yǎng)，如此反復(fù)進(jìn)行，則稱為重復(fù)補(bǔ)料分批培養(yǎng)（repeated fed-batch culture）。與傳統(tǒng)分批發(fā)酵相比，補(bǔ)料分批發(fā)酵的優(yōu)點(diǎn)在于使發(fā)酵系統(tǒng)中的基質(zhì)濃度維持在低水平，這有以下優(yōu)點(diǎn)：①可除去快速利用碳源的阻遏效應(yīng)，并維持適當(dāng)?shù)木w濃度，以減輕供氧矛盾；②避免有毒代謝物的抑菌作用；③大為減少了無(wú)菌操作要求十分嚴(yán)格的接種的次數(shù)。與連續(xù)發(fā)酵相比，補(bǔ)料分批培養(yǎng)不會(huì)產(chǎn)生菌種老化和變異等問(wèn)題。故其應(yīng)用范圍十分廣泛。
5.同步培養(yǎng) 能使培養(yǎng)的微生物處于較一致的，生長(zhǎng)發(fā)育在同一階段上的培養(yǎng)方法叫同步培養(yǎng)法。利用同步培養(yǎng)法控制細(xì)胞的生長(zhǎng)，使它們處于同一生長(zhǎng)階段，所有細(xì)胞都能同時(shí)分裂，這種生長(zhǎng)方式叫同步生長(zhǎng)（圖3—4）。用同步培養(yǎng)法得到的培養(yǎng)物叫同步培養(yǎng)物（synchronous culture）。這樣，群體和個(gè)體行為一致，即可用研究群體的方法來(lái)研究個(gè)體水平上的問(wèn)題。由于同步群體的個(gè)體差異，同步生長(zhǎng)往往最多維持2個(gè)~3個(gè)世代，然后又逐步變?yōu)殡S機(jī)生長(zhǎng)。
青島海博生物技術(shù)有限公司，主要從事生物、醫(yī)學(xué)及相關(guān)領(lǐng)域的產(chǎn)品技術(shù)研究、開(kāi)發(fā)和銷售，涉及分子生物學(xué)、生物化學(xué)、醫(yī)用診斷試劑以及各種微生物、檢驗(yàn)用培養(yǎng)基等諸多方面。
海博生物技術(shù)有限公司現(xiàn)有產(chǎn)品：干燥培養(yǎng)基、顯色培養(yǎng)基、常規(guī)檢驗(yàn)培養(yǎng)基、藥典培養(yǎng)基、植物組織培養(yǎng)基、運(yùn)送培養(yǎng)基、臨床檢驗(yàn)培養(yǎng)基、動(dòng)物疫苗培養(yǎng)基、一次性平板等。
干燥培養(yǎng)基：有600多個(gè)品種，采用法國(guó)進(jìn)口原料制作， 質(zhì)量穩(wěn)定、特異性好，并在不斷開(kāi)發(fā)新產(chǎn)品。
支原體培養(yǎng)基：由于質(zhì)量穩(wěn)定、特異性好，廣泛用于全國(guó)各大醫(yī)院和皮膚病?？漆t(yī)院，得到用戶的一致好評(píng)。
顯色培養(yǎng)基：生產(chǎn)金黃葡萄球菌顯色培養(yǎng)基、大腸桿菌顯色培養(yǎng)基、大腸菌群顯色培養(yǎng)基、大腸桿菌和大腸菌群二合一顯色、李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基、0157菌顯色培養(yǎng)基、弧菌顯色培養(yǎng)基、坂崎桿菌顯色培養(yǎng)基等。
生化試劑：經(jīng)營(yíng)多種生化試劑，品種齊全，質(zhì)量保證。
4.微生物的培養(yǎng)方法有哪些
1905年，德國(guó)微生物學(xué)家科赫因?qū)Y(jié)核桿菌和結(jié)核菌素的研究取得重大成就而榮獲諾貝爾獎(jiǎng)金。
他發(fā)明固體培養(yǎng)基，用它分離培養(yǎng)細(xì)菌，創(chuàng)造細(xì)菌的純粹培養(yǎng)法。他又改進(jìn)細(xì)菌染色法，為研究細(xì)菌的形態(tài)和結(jié)構(gòu)創(chuàng)造有利條件。
荷蘭科學(xué)家E.C.翰遜教授研究使啤酒發(fā)酵的酵母，創(chuàng)造單細(xì)胞的純粹培養(yǎng)法。以后，又有人采用純粹培養(yǎng)法選擇適當(dāng)酵母，用于啤酒的工業(yè)生產(chǎn)，為純粹培養(yǎng)法在工業(yè)發(fā)酵上的應(yīng)用開(kāi)辟了道路。
翰遜的學(xué)生哈斯發(fā)現(xiàn)，當(dāng)時(shí)用的由明膠制成的固體培養(yǎng)基很容易發(fā)生液化現(xiàn)象，使用時(shí)有困難。哈斯的妻子建議用瓊脂代替明膠，獲得了較好的效果。
這種瓊脂培養(yǎng)基被后人采用，一直沿用到今天。后來(lái)又有人創(chuàng)造一種培養(yǎng)皿，可供微生物平板分離用。
從此以后，分離出的微生物日益增多，新的微生物不斷被發(fā)現(xiàn)。這樣，可供工業(yè)用的微生物也日益充實(shí)起來(lái)，一支微生物生力軍異軍突起。
5.“細(xì)菌培養(yǎng)”的具體培養(yǎng)步驟是什么
以光合細(xì)菌培養(yǎng)方法為例。光合細(xì)菌培養(yǎng)的方法，按次序分為容器、工具的消毒， 培養(yǎng)基的制備，接種和培養(yǎng)管理四個(gè)步驟。
（一）容器、工具的消毒參考、此處從略。
（二）培養(yǎng)基的制備
1.培養(yǎng)用水
如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是淡水種，菌種培養(yǎng)可用蒸餾水，生產(chǎn)培養(yǎng)可用消毒的自來(lái)水（或井水）配制。如果培養(yǎng)的光合細(xì)菌是海水種，則用天然海水配制培養(yǎng)基，注意在海水中加入磷元素時(shí)，不能用 磷酸氫二鉀，應(yīng)用 磷酸二氫鉀，不然會(huì)產(chǎn)生大量沉淀。
2.滅菌和消毒菌種培養(yǎng)用的培養(yǎng)基應(yīng)連同培養(yǎng)容器用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌。小型生產(chǎn)性培養(yǎng)可把配好的培養(yǎng)液用普通鋁鍋或大型三角燒瓶煮沸消毒。大型生產(chǎn)性培養(yǎng)則把經(jīng)沉淀砂濾后的水用漂白粉（或漂白液）消毒后使用。
3. 培養(yǎng)基配制根據(jù)所培養(yǎng)種類的營(yíng)養(yǎng)需要選擇合適的培養(yǎng)基配方。按培養(yǎng)基配方把所需物質(zhì)稱量，逐一溶解，混合，配成培養(yǎng)基。也可先配成母液，使用時(shí)按比例加入一定的量即可。
（三）接種培養(yǎng)基配好后，應(yīng)立即進(jìn)行接種。光合細(xì)菌生產(chǎn)性培養(yǎng)的按種量比較高，一般為20%~50%，即菌種 母液量和新配 培養(yǎng)液雖之比為1∶4~1∶1，不應(yīng)低于20%，尤其是微氣培養(yǎng)，接種量更應(yīng)高些，否則光合細(xì)菌在培養(yǎng)液中很難占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，影響培養(yǎng)的最終產(chǎn)量和質(zhì)量。
（四）培養(yǎng)管理光合細(xì)菌的培養(yǎng)過(guò)程中，管理工作包括日常管理操作和測(cè)試，生長(zhǎng)情況的觀察、檢查以及出現(xiàn)問(wèn)題的分析處理等三個(gè)方面。
根據(jù)臨床初步診斷及待檢細(xì)菌的種類，可選用不同環(huán)境條件進(jìn)行培養(yǎng)。常用的有需氧培養(yǎng)法、二氧化碳培養(yǎng)法和厭氧培養(yǎng)法。為了提高檢驗(yàn)的正確率，同一標(biāo)本常同時(shí)采用兩種或三種不同的培養(yǎng)法。
（一）需氧培養(yǎng)法
本法是臨床細(xì)菌室最常用的培養(yǎng)方法，適于一般需氧和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。將已接種好的平板、斜面和液體培養(yǎng)基等，置于35℃溫箱中孵育18~24h，一般細(xì)菌可于培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，但有些難以生長(zhǎng)的細(xì)菌需培養(yǎng)更長(zhǎng)的時(shí)間才能生長(zhǎng)。另外，有的細(xì)菌最適生長(zhǎng)溫度是28℃~30℃，如鼠疫耶爾森菌，甚至在4℃也能生長(zhǎng)，如李斯特菌。
（二）二氧化碳培養(yǎng)法
有些細(xì)菌初次分離培養(yǎng)時(shí)須置5%~l0%C02環(huán)境才能生長(zhǎng)良好，如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，牛布魯菌等。常以下列方法供給C02。
1.二氧化碳培養(yǎng)箱：是一臺(tái)特制的培養(yǎng)箱，既能調(diào)節(jié)C02的含量，又能調(diào)節(jié)所需的溫度。C02從鋼瓶通過(guò)培養(yǎng)箱的C02，運(yùn)送管進(jìn)入培養(yǎng)箱內(nèi)，調(diào)節(jié)好所需C02，濃度自動(dòng)控制器后，將接種好的培養(yǎng)基直接放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。此法適于大型實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。
2.燭缸法：將已接種好的培養(yǎng)基置干燥器內(nèi)，并放入點(diǎn)燃的蠟燭。干燥器蓋的邊緣涂上凡士林，蓋上蓋子，燭光經(jīng)幾分鐘后自行熄滅，此時(shí)干燥器內(nèi)C02含量約占5%~l0%，然后將干燥器放入35℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)時(shí)間一般為18~24h，少數(shù)菌種需培養(yǎng)3~7天或更長(zhǎng)。
3.化學(xué)法：按每升容積加入碳酸氫鈉0.49和濃鹽酸0.35ml的比例，分別置于容器內(nèi)。將容器連同接種好的培養(yǎng)基都放人干燥器內(nèi)，蓋緊干燥器的蓋子，傾斜容器使?jié)恹}酸與碳酸氫鈉接觸生成C02。
（三）厭氧培養(yǎng)法
適用于專性厭氧菌和兼性厭氧菌的培養(yǎng)。常用的厭氧培養(yǎng)法有：①皰肉培養(yǎng)基法；②焦性沒(méi)食子酸法；③厭氧罐法；④氣袋法；⑤厭氧手套箱法。
6.細(xì)菌分離培養(yǎng)的基本要領(lǐng)和常用方法有哪些
一、基本要領(lǐng)
菌種分離主要在培養(yǎng)皿上進(jìn)行，常用的方法是稀釋法和劃線法。
菌種分離的目的是是微生物的一個(gè)個(gè)體通過(guò)繁殖，在固體培養(yǎng)基上長(zhǎng)出肉眼能見(jiàn)的群體，然后根據(jù)培養(yǎng)特征，用接種針調(diào)取所需菌種并在顯微鏡下檢查，證明為單一形狀的菌體。
改變培養(yǎng)基條件也有助于菌種分離。沒(méi)有一種培養(yǎng)基或一種培養(yǎng)條件能夠滿足一切微生物生長(zhǎng)的需要，在一定程度上所有的培養(yǎng)基都是選擇性的。
如果某種微生物的生長(zhǎng)需要是已知的，也可以設(shè)計(jì)特定環(huán)境使之適合這種微生物的生長(zhǎng)，因而能夠從混雜的微生物群體中把這種微生物選擇培養(yǎng)出來(lái)，盡管在混雜的微生物群體中這種微生物可能只占少數(shù)。
二、方法
1、稀釋倒平板法
首先把微生物懸液作一系列的稀釋（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分別取不同稀釋液少許，與已熔化并冷卻至50℃左右的瓊脂培養(yǎng)基混合，搖勻后，傾入滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿中，待瓊脂凝固后，制成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養(yǎng)一定時(shí)間即可出現(xiàn)菌落。
如果稀釋得當(dāng)，在平板表面或瓊脂培養(yǎng)基中就可出現(xiàn)分散的單個(gè)菌落，這個(gè)菌落可能就是由一個(gè)細(xì)菌細(xì)胞繁殖形成的。隨后挑取該單個(gè)菌落，或重復(fù)以上操作數(shù)次，便可得到純培養(yǎng)。
2、涂布平板法
因?yàn)閷⑽⑸飸乙合燃拥捷^燙的培養(yǎng)基中再倒平板易造成某些熱敏感菌的死亡，且采用稀釋倒平板法也會(huì)使一些嚴(yán)格好氧菌因被固定在瓊脂中間缺乏氧氣而影響其生長(zhǎng)，因此在微生物學(xué)研究中常用的純種分離方法是涂布平板法。
其做法是先將已熔化的培養(yǎng)基倒入無(wú)菌平皿，制成無(wú)菌平板，冷卻凝固后，將一定量的微生物懸液滴加在平板表面，再用無(wú)菌玻璃涂棒將菌液均勻分散至整個(gè)平板表面，經(jīng)培養(yǎng)后挑取單個(gè)菌落。
3、平板劃線法
最簡(jiǎn)單的分離微生物的方法是平板劃線法，即用接種環(huán)以無(wú)菌操作沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。
有時(shí)這種單菌落并非都由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的，故必須反復(fù)分離多次才可得到純種。其原理是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點(diǎn)到線”稀釋而達(dá)到分離目的的。劃線的方法很多，常見(jiàn)的比較容易出現(xiàn)單個(gè)菌落的劃線方法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。
4、稀釋搖管法
用固體培養(yǎng)基分離嚴(yán)格厭氧菌有特殊性，如果該微生物暴露于空氣中不立即死亡，可以采用通常的方法制備平板，然后置放在封閉的容器中培養(yǎng)，容器中的氧氣可采用化學(xué)、物理或生物的方法清除。
對(duì)于那些對(duì)氧氣更為敏感的厭氧性微生物，純培養(yǎng)的分離則可采用稀釋搖管培養(yǎng)法進(jìn)行，它是稀釋倒平板法的一種變通形式。
先將一系列盛無(wú)菌瓊脂培養(yǎng)基的試管加熱使瓊脂熔化后冷卻并保持在50℃左右，將待分離的材料用這些試管進(jìn)行梯度稀釋，試管迅速搖動(dòng)均勻，冷凝后，在瓊脂柱表面傾倒一層滅菌液體石蠟和固體石蠟的混合物，將培養(yǎng)基和空氣隔開(kāi)。
培養(yǎng)后，菌落形成在瓊脂柱的中間。進(jìn)行單菌落的挑取和移植，需先用一只滅菌針將液體石蠟--石蠟蓋取出，再用一只毛細(xì)管插入瓊脂和管壁之間，吹入無(wú)菌無(wú)氧氣體，將瓊脂柱吸出，置放在培養(yǎng)皿中，用無(wú)菌刀將瓊脂柱切成薄片進(jìn)行觀察和菌落的移植。
擴(kuò)展資料
在以上介紹的幾種方法中，平板分離法普遍用于實(shí)驗(yàn)室微生物的分離與純化，稀釋法是液體培養(yǎng)基分離純化常用的方法。
一般情況下可以通過(guò)適當(dāng)改善培養(yǎng)基的條件來(lái)培養(yǎng)特點(diǎn)菌種。
如為了得到嗜熱微生物，可在50℃~60℃下進(jìn)行培養(yǎng)。有時(shí)投加相應(yīng)的抑制劑也能提高菌種分離效果，如在土壤樣品的懸浮液中投加10%的苯酚數(shù)滴，可以抑制霉菌和細(xì)菌的生長(zhǎng)，而有利于放線菌的分離。在培養(yǎng)基中投加一定量的青霉素或鏈霉素能抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，而有利于霉菌的分離。
參考資料來(lái)源：搜狗百科-菌種分離
7.微生物獲得純培養(yǎng)的方法理論依據(jù)是什么
微生物純培養(yǎng)的方法
一、固體培養(yǎng)基分離
1、稀釋倒平板
特點(diǎn)：菌落分離較為均勻，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)結(jié)果相對(duì)準(zhǔn)確。但操作相對(duì)麻煩，熱敏感菌有時(shí)易被燙死，而嚴(yán)格好氧菌也可能因被固定在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)受到影響。
2、涂布平板法
特點(diǎn)：操作相對(duì)簡(jiǎn)單，是較常使用的常規(guī)方法。但有時(shí)會(huì)因涂布不均勻使某些部位的菌落不能分開(kāi)，進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)需對(duì)稀釋和涂布過(guò)程的操作特別注意，否則不易得到準(zhǔn)確的結(jié)果。
3、平板劃線法
特點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，多用于對(duì)已有純培養(yǎng)的確認(rèn)和再次分離。
應(yīng)用：這三種方法可用于所有能在固體培養(yǎng)基表面形成菌落的微生物的純培養(yǎng)分離。并且，通過(guò)選用適當(dāng)?shù)倪x擇平板及培養(yǎng)條件，可直接分離各種具有特定生理特征的微生物。和厭氧罐或厭氧手套箱技術(shù)結(jié)合，這3種方法也可用于獲得各種厭氧菌的純培養(yǎng)。
4、稀釋搖管法
特點(diǎn)：稀釋倒平板法的一種變通形式，但由于菌落形成在瓊脂柱的中間，觀察和挑取都相對(duì)困難。
應(yīng)用：在缺乏專業(yè)的厭氧操作設(shè)備的情況下對(duì)嚴(yán)格厭氧菌進(jìn)行分離和觀察。
二、液體培養(yǎng)基分離
1、稀釋法
特點(diǎn)：工作量大，是否獲得純培養(yǎng)需依靠統(tǒng)計(jì)學(xué)的推測(cè)。
應(yīng)用：不能或不易在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的微生物進(jìn)行純培養(yǎng)分離或數(shù)量統(tǒng)計(jì)。
2、富集培養(yǎng)
特點(diǎn)：一般不能直接獲得微生物的純培養(yǎng)，在通過(guò)富集培養(yǎng)使原本在自然環(huán)境中占少數(shù)的微生物的數(shù)量大大提高后，需再通過(guò)平板法進(jìn)行相應(yīng)微生物純培養(yǎng)的分離和檢測(cè)。 應(yīng)用：
(1)根據(jù)某種微生物的特殊生長(zhǎng)要求，按照意愿從自然界中對(duì)這種微生物進(jìn)行有針對(duì)性的有效分離；
(2)分離培養(yǎng)出由科學(xué)家設(shè)計(jì)的特定環(huán)境中能生長(zhǎng)的微生物，盡管我們并不知道什么微生物能在這種特定的環(huán)境中生長(zhǎng)。
三、顯微操作
單細(xì)胞（孢子）挑取
特點(diǎn)：分離過(guò)程直觀，可靠，但對(duì)儀器和操作技術(shù)要求較高，多限于高度專業(yè)化的科學(xué)研究。而挑取的微生物單細(xì)胞或孢子需經(jīng)固體或液體培養(yǎng)基培養(yǎng)后才能獲得其純培養(yǎng)物。 應(yīng)用：從樣品中直接分離所需的微生物細(xì)胞或孢子，獲得其純培養(yǎng)。
