檢測(cè)細(xì)胞活力的實(shí)驗(yàn)方法(細(xì)胞活力測(cè)定的方法)
1.細(xì)胞活力測(cè)定的方法有哪些
根據(jù)每個(gè)細(xì)胞有一定的重量而設(shè)計(jì)的。
它可以用于單細(xì)胞、多細(xì)胞以及絲狀體微生物生長(zhǎng)的測(cè)定。將一定體積的樣品通過(guò)離心或過(guò)濾將菌體分離出來(lái)，經(jīng)洗滌，再離心后直接稱(chēng)重，求出濕重，如果是絲狀體微生物，過(guò)濾后用濾紙吸去菌絲之間的自由水，再稱(chēng)重求出濕重。
不論是細(xì)菌樣品還是絲狀菌樣品，可以將它們放在已知重量的平皿或燒杯內(nèi)，于105℃烘干至恒重，取出放入干燥器內(nèi)冷卻，再稱(chēng)量，求出微生物干重。如果要測(cè)定固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的放線菌或絲狀真菌，可先加熱至50℃，使瓊脂熔化，過(guò)濾得菌絲體，再用50℃的生理鹽水洗滌菌絲，然后按上述方法求出菌絲體的濕重或干重。
除了干重、濕重反映細(xì)胞物質(zhì)重量外，還可以通過(guò)測(cè)定細(xì)胞中蛋白質(zhì)或DNA的含量反映細(xì)胞物質(zhì)的量。蛋白質(zhì)是細(xì)胞的主要成分，含量也比較穩(wěn)定，其中氮是蛋白質(zhì)的重要組成元素。
從一定體積的樣品中分離出細(xì)胞，洗滌后，按凱氏定氮法測(cè)出總氮量。蛋白質(zhì)含氮量為16%，細(xì)菌中蛋白質(zhì)含量占細(xì)菌固形物的50%一80%，一般以65%為代表，有些細(xì)菌則只占13%一14%，這種變化是由菌齡和培養(yǎng)條件不同所產(chǎn)生的。
因此總含氮量與蛋白質(zhì)總量之間的關(guān)系可按下列公式計(jì)算：蛋白質(zhì)總量=含氮量*6.25核酸DNA是微生物的重要遺傳物質(zhì)，每個(gè)細(xì)菌的DNA含量相當(dāng)恒定，平均為8.4*`10^(-5)`NG。因此從一定體積的細(xì)菌懸液中所含的細(xì)菌中提取DNA，求得DNA含量，再計(jì)算出這一定體積的細(xì)菌懸液所含的細(xì)菌總數(shù)。
2.如何選用細(xì)胞活力的測(cè)試方法
細(xì)胞活性測(cè)定方法有臺(tái)盼藍(lán)染色法、克?。洌┬纬煞?、3H 放射性同位素?fù)饺敕āTT 法等。其中 MTT 法以其快速簡(jiǎn)便，不需要特殊檢測(cè)儀器、無(wú)放射性同位素、適合大批量檢測(cè)的特點(diǎn)而得到廣泛的應(yīng)用。
但 MTT 法形成的 Formazan 為水不溶性的，需要加有機(jī)溶劑溶解，由于在去上清操作時(shí)會(huì)有可能帶走小部分的 Formazan ，故有時(shí)重復(fù)性略差。為了解決這個(gè)問(wèn)題，研究人員又開(kāi)發(fā)了很多種水溶性的四氮唑鹽類(lèi)：如 XTT 、CCK-8 ( WST-8 )等。
