數細胞實(shí)驗(觀(guān)察植物細胞時(shí)顯微鏡使用注意事項)
1.觀(guān)察植物細胞時(shí)顯微鏡使用注意事項
1.右手握住鏡臂，左手托住鏡座。
2.把顯微鏡放在實(shí)驗臺上，略偏左（顯微鏡放在距實(shí)驗臺邊緣7厘米左右處）。安裝好目鏡和物鏡。
二、對光 3.轉動(dòng)轉換器，使低倍物鏡對準通光孔（物鏡的前端與載物臺要保持2厘 米的距離）。 4.把一個(gè)較大的光圈對準通光孔。
左眼注視目鏡內（右眼睜開(kāi)，同時(shí)畫(huà)圖）。轉動(dòng)反光鏡，使光線(xiàn)通過(guò)通光孔反射到鏡筒內。
通過(guò)目鏡，可以看到白亮的視野。 三、觀(guān)察 5.把所要觀(guān)察的玻片標本（也可以用印有“6”字的薄紙片制成）放在載物臺上，用壓片夾壓住，標本要正對通光孔的中心。
6.轉動(dòng)粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩下降，直到物鏡接近玻片標本為止（眼睛看著(zhù)物鏡，以免物鏡碰到玻片標本）。 7.左眼向目鏡內看，同時(shí)反方向轉動(dòng)粗準焦螺旋，使鏡筒緩緩上升，直到看清物像為止。
再略微轉動(dòng)細準焦螺旋，使看到的物像更加清晰。 注意事項：實(shí)驗完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。
轉動(dòng)轉換器，把兩個(gè)物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。
其實(shí)書(shū)上挺詳細的，看看書(shū)吧，也許對你會(huì )有幫助。
2.Transwell細胞體外侵襲實(shí)驗的注意事項
2. 1
NIH3T3 細胞制備的趨化因子與胎牛血清 趨化因子是能使細胞產(chǎn)生趨化運動(dòng)的一類(lèi)細胞因子[2 ] 。目前利用NIH3T3 細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實(shí)驗的實(shí)驗室比較多，時(shí)間較長(cháng)且實(shí)驗步驟繁瑣。眾所周知，胎牛血清中有趨化因子，我們在不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實(shí)驗中發(fā)現用胎牛血清和用NIH3T3 細胞制備的趨化因子做細胞體外侵襲實(shí)驗效果是一樣的，兩組遷移的細胞數很接近。在實(shí)驗時(shí)間上，用NIH3 T3細胞制備趨化因子做細胞體外侵襲實(shí)驗周期為1 周，而用胎牛血清作趨化因子做細胞體外侵襲實(shí)驗周期為2 d ，實(shí)驗時(shí)間節省了很多。因此認為可以用胎牛血清來(lái)代替NIH3T3 細胞制備的趨化因子。
2. 2 細胞的準備 所需細胞應處在對數生長(cháng)期，細胞活力需大于95 %。如果細胞活力小，就會(huì )造成細胞穿透能力下降，影響實(shí)驗結果。
2. 3 擦去Matrigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞 先用干棉簽將上室內液體吸去，再用蒸餾水浸濕的棉簽輕輕擦去Mat rigel 凝膠和聚碳酯膜上表面的細胞，如果沒(méi)有擦凈聚碳酯膜上表面的細胞，在細胞計數時(shí)就會(huì )將沒(méi)擦掉的細胞也計進(jìn)來(lái)。尤其是細胞為圓形的時(shí)候，就會(huì )分辨不出是穿過(guò)去的細胞還是沒(méi)穿過(guò)去的細胞，對于長(cháng)梭形細胞來(lái)說(shuō)，穿過(guò)去的細胞為長(cháng)梭形，沒(méi)穿過(guò)去的細胞多為圓形。
2. 4 蘇木素染色 上室浸泡在新蘇木素中的時(shí)間為1 min ，用過(guò)多次的蘇木素為2 min。在研究粉防己堿對HUVEC 人類(lèi)臍靜脈內皮細胞遷移能力的抑制作用沒(méi)有將多余蘇木素洗去，直接脫水、透明，造成細胞圖片背景模糊，細胞不清楚。在作不同濃度TNFα刺激下的HCCC29810 膽囊癌細胞體外侵襲能力的強弱實(shí)驗時(shí)我們將其置于盛有自來(lái)水的燒杯中，反復漂洗幾次，將多余蘇木素洗去再行脫水、透明；這樣做出的細胞圖片背景干凈，細胞清楚。
2. 5 脫水和透明時(shí)間 脫水時(shí)間各為1 min ，在二甲苯中的時(shí)間不要過(guò)長(cháng)，以2 min~3 min 為宜；尤其是同時(shí)操作多個(gè)樣本時(shí)，時(shí)間過(guò)長(cháng)就會(huì )造成部分聚碳酯膜從上室基底部自動(dòng)脫落下來(lái)，上室間粘連在一起，造成樣本混淆，實(shí)驗失敗。建議在最后一步實(shí)驗時(shí)需二人協(xié)做，一人辨別并取出樣本，一人小心將聚碳酯膜自上室基底切取下來(lái)，置載玻片上中性樹(shù)脂封片并及時(shí)編號。
2. 6 細胞計數 當實(shí)驗用的細胞為圓形時(shí)，實(shí)驗人員容易將聚碳酯膜上小孔誤認為細胞進(jìn)行計數。我們在作VEGF 對人結腸癌HT229 細胞體外侵襲能力的影響時(shí)，發(fā)現HT229細胞很小，很容易將聚碳酯膜上小孔誤認為細胞進(jìn)行計數 。
