核酸含量測(cè)定常用的方法(測(cè)定核酸含量的方法)
1.測(cè)定核酸含量的方法有哪些
核酸中的有機(jī)無(wú)機(jī)磷酸——→無(wú)機(jī)磷酸+鉬酸——→磷鉬酸+還原劑（抗壞血酸等）——→鉬蘭
鉬蘭的最大吸收波長(zhǎng)在660nm，在一定濃度范圍內(nèi)，溶液的吸收值與無(wú)機(jī)磷的含量成正比。該法測(cè)得的是總磷量，需減去無(wú)機(jī)磷的含量才是核酸的含磷量。
（二）定糖法
核酸中的戊糖可在濃鹽酸或濃硫酸作用下脫水生成醛類(lèi)化合物，醛類(lèi)化合物可與某些成色劑縮合成有色化合物，可用比色法或分光光度法測(cè)定其溶液中的吸收值，在一定濃度范圍內(nèi)，溶液的吸收值與核酸的含量成正比。
1、核糖的測(cè)定
生成的綠色化合物在λ=670nm處有最大的吸收值。
2、脫氧核糖的測(cè)定
DNA中的脫氧核糖可在濃硫酸作用下脫水生成ω-羥基-γ-酮戊酸，該化合物可與二苯胺生成蘭色化合物，在λ=595nm處有最大吸收值。
（三）紫外吸收法
根據(jù)核酸分子中的嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)在λ=260nm處有最大吸收值，可采用紫外分光光度法測(cè)定核酸的含量。
2.核酸含量測(cè)定的方法和原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中堿基共軛結(jié)構(gòu)在近紫外光波長(zhǎng)260nm處有最大吸收，吸收強(qiáng)度與核酸濃度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過(guò)測(cè)定樣品中的有機(jī)P量來(lái)進(jìn)行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。
核酸廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。不同的核酸，其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。
根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡(jiǎn)稱(chēng)RNA）和脫氧核糖核酸（簡(jiǎn)稱(chēng)DNA）。
3.核酸含量的測(cè)定方法及原理都有哪些
核酸定量常用方法及原理如下： 1、光吸收法：核酸中堿基共軛結(jié)構(gòu)在近紫外光波長(zhǎng)260nm處有最大吸收，吸收強(qiáng)度與核酸濃度成正比，因此可以用于核酸定量。
2、定P法：核酸中P含量約為9.5%，因此可以通過(guò)測(cè)定樣品中的有機(jī)P量來(lái)進(jìn)行核酸定量。核酸是由許多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，為生命的最基本物質(zhì)之一。
核酸廣泛存在于所有動(dòng)植物細(xì)胞、微生物體內(nèi)，生物體內(nèi)的核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合形成核蛋白。不同的核酸，其化學(xué)組成、核苷酸排列順序等不同。
根據(jù)化學(xué)組成不同，核酸可分為核糖核酸（簡(jiǎn)稱(chēng)RNA）和脫氧核糖核酸（簡(jiǎn)稱(chēng)DNA）。
4.核酸檢測(cè)方法有哪些
核酸檢測(cè)采用咽拭子檢測(cè)，有口咽拭子采樣和鼻咽拭子采樣兩種方式。
口咽拭子采樣就是在咽喉部位用棉簽涂擦，刷取咽喉部位上皮細(xì)胞的檢測(cè)。受檢測(cè)者只要放松心情，張口發(fā)出“啊——”的聲音就可以了，檢測(cè)過(guò)程并沒(méi)有創(chuàng)傷風(fēng)險(xiǎn)，是非常安全的檢測(cè)。
檢測(cè)時(shí)可能會(huì)有惡心、想要嘔吐的不適感覺(jué)，不過(guò)這些不適癥狀通常只需要半分鐘到兩分鐘左右就可以完全緩解了。鼻咽拭子采樣是將一根細(xì)棉簽深入鼻孔，從下鼻道深入抵達(dá)鼻咽后壁，然后捻轉(zhuǎn)棉簽取樣。
棉簽進(jìn)入鼻腔的深度約為鼻尖到耳垂的距離。擴(kuò)展資料：核酸檢測(cè)相關(guān)知識(shí)：核酸檢測(cè)是檢測(cè)病毒的方法，它可以更早發(fā)現(xiàn)感染。
現(xiàn)在臨床中對(duì)乙肝、丙肝、艾滋病都開(kāi)展了核酸檢測(cè)，可以在抗體產(chǎn)生前檢測(cè)到血液中是否存在病毒。而一些呼吸道疾病可以通過(guò)咽拭子或者呼吸道分泌物的核酸檢測(cè)來(lái)判斷是否感染，以及推測(cè)是否具有傳染性。
季節(jié)性流感、禽流感、冠狀病毒感染等通過(guò)咽拭子檢測(cè)可以方便地判斷出上呼吸道是否存在病毒成份，從而判斷被檢測(cè)者是否屬于感染者。新冠病毒的核酸檢測(cè)已經(jīng)是比較成熟的檢測(cè)方法了，只要在咽喉部位擦拭幾秒鐘就可以采集到標(biāo)本。
通過(guò)分析判斷是否有新冠病毒的核酸成分，可以盡早發(fā)現(xiàn)感染者，甚至在感染者出現(xiàn)癥狀前就可以檢測(cè)到陽(yáng)性。感染者經(jīng)過(guò)隔離治療后咽拭子檢測(cè)陰性說(shuō)明病毒已經(jīng)清除，不具有傳染性了。
目前兩次咽拭子核酸檢測(cè)陰性是確診病例和無(wú)癥狀感染者解除隔離的標(biāo)準(zhǔn)之一。參考資料來(lái)源：人民網(wǎng)-核酸檢測(cè)究竟是怎么回事。
5.核酸定量常見(jiàn)方法
去百度文庫(kù)，查看完整內(nèi)容>內(nèi)容來(lái)自用戶(hù)：孤墨陽(yáng)核酸定量的常用方法、原理、優(yōu)缺點(diǎn)等。
紫外分光光度法：利用核酸中的嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，在紫外光的照射下在260nm處有最大吸收峰的原理對(duì)核酸進(jìn)行定量和定性的方法。是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)較為常用的方法。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低。缺點(diǎn)：靈敏度不夠高，只能測(cè)定總核酸量，不能區(qū)分核算種類(lèi)；易受樣品中其他雜質(zhì)的干擾（如pH值、殘留的提取劑等）。
熒光染料法：基于熒光染料與核酸分子結(jié)合，發(fā)出的熒光信號(hào)強(qiáng)度與結(jié)合的核酸分子數(shù)成正比的原理設(shè)計(jì)的。常用的熒光染料有嗅化乙錠、SYBR系列染料等。
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，所需樣品量少，可重復(fù)性高。缺點(diǎn)：染料一般都含有較高毒性，檢測(cè)結(jié)果受染料與核酸的結(jié)合率影響。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR法：在反應(yīng)體系內(nèi)加入熒光基團(tuán)，通過(guò)熒光基團(tuán)發(fā)出熒光信號(hào)經(jīng)積累來(lái)實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR的反應(yīng)過(guò)程，最后通過(guò)相對(duì)定量或者絕對(duì)定量的方法對(duì)未知濃度的核酸進(jìn)行定量分析。常用的檢測(cè)方法有TaqMan探針和熒光染料兩種。
TaqMan探針?lè)ǎ豪肨aqman酶在特異性引物上增加一條熒光雙標(biāo)記的探針，分別標(biāo)記有熒光信號(hào)基團(tuán)R和淬滅基團(tuán)Q，當(dāng)二者都存在的時(shí)候R基團(tuán)受Q基團(tuán)影響不發(fā)出熒光信號(hào)，而在PCR反應(yīng)過(guò)程中，聚合酶將探針的堿基水解，R與Q基團(tuán)分離，R基團(tuán)發(fā)出熒光信號(hào)，模板每擴(kuò)增一次，就產(chǎn)生一次熒光信號(hào)，通過(guò)對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)和繪制熒光信號(hào)曲線(xiàn)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)比分析，可對(duì)核酸進(jìn)行定量。優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，缺點(diǎn)是探針序列設(shè)計(jì)時(shí)需要強(qiáng)特異。
6.核酸定量常見(jiàn)方法
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內(nèi)容來(lái)自用戶(hù)：孤墨陽(yáng)
核酸定量的常用方法、原理、優(yōu)缺點(diǎn)等。
紫外分光光度法：利用核酸中的嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，在紫外光的照射下在260nm處有最大吸收峰的原理對(duì)核酸進(jìn)行定量和定性的方法。是實(shí)驗(yàn)室內(nèi)較為常用的方法。
優(yōu)點(diǎn)：操作簡(jiǎn)單，設(shè)備要求低。
缺點(diǎn)：靈敏度不夠高，只能測(cè)定總核酸量，不能區(qū)分核算種類(lèi)；易受樣品中其他雜質(zhì)的干擾（如pH值、殘留的提取劑等）。
熒光染料法：基于熒光染料與核酸分子結(jié)合，發(fā)出的熒光信號(hào)強(qiáng)度與結(jié)合的核酸分子數(shù)成正比的原理設(shè)計(jì)的。常用的熒光染料有嗅化乙錠、SYBR系列染料等。
優(yōu)點(diǎn)：靈敏度高，所需樣品量少，可重復(fù)性高。
缺點(diǎn)：染料一般都含有較高毒性，檢測(cè)結(jié)果受染料與核酸的結(jié)合率影響。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR法：
在反應(yīng)體系內(nèi)加入熒光基團(tuán)，通過(guò)熒光基團(tuán)發(fā)出熒光信號(hào)經(jīng)積累來(lái)實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR的反應(yīng)過(guò)程，最后通過(guò)相對(duì)定量或者絕對(duì)定量的方法對(duì)未知濃度的核酸進(jìn)行定量分析。常用的檢測(cè)方法有TaqMan探針和熒光染料兩種。
TaqMan探針?lè)ǎ豪肨aqman酶在特異性引物上增加一條熒光雙標(biāo)記的探針，分別標(biāo)記有熒光信號(hào)基團(tuán)R和淬滅基團(tuán)Q，當(dāng)二者都存在的時(shí)候R基團(tuán)受Q基團(tuán)影響不發(fā)出熒光信號(hào)，而在PCR反應(yīng)過(guò)程中，聚合酶將探針的堿基水解，R與Q基團(tuán)分離，R基團(tuán)發(fā)出熒光信號(hào)，模板每擴(kuò)增一次，就產(chǎn)生一次熒光信號(hào)，通過(guò)對(duì)熒光信號(hào)的檢測(cè)和繪制熒光信號(hào)曲線(xiàn)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)比分析，可對(duì)核酸進(jìn)行定量。優(yōu)點(diǎn)是特異性強(qiáng)，缺點(diǎn)是探針序列設(shè)計(jì)時(shí)需要強(qiáng)特異
7.核酸的定量測(cè)定用什么方法
核酸的定量測(cè)定——定磷法 [原理] 磷的測(cè)定方法很多，F(xiàn)iske-Subbarow定磷法是一經(jīng)典的但至今仍被經(jīng)常采用的方法，它具有靈敏、簡(jiǎn)便的特點(diǎn)。
各種含磷有機(jī)物經(jīng)硫酸或過(guò)氯酸水解，使有機(jī)磷消化成為無(wú)機(jī)磷。無(wú)機(jī)磷在酸性條件下，與鉬酸鹽（常用鉬酸銨或鉬酸鈉）反應(yīng)生成磷鉬酸鹽絡(luò)合物。
用還原劑處理，磷鉬酸鹽絡(luò)合物被還原生成鉬藍(lán)，在660nm處有最大光吸收峰。在一定濃度范圍內(nèi)，顏色的深淺與磷含量成正比關(guān)系。
因此可應(yīng)用分光光度法進(jìn)行磷的定量測(cè)定。 生物幫上面相關(guān)的專(zhuān)題資料的， 生物問(wèn)答 /。
