1.結晶和重結晶:利用物質(zhì)在溶液中溶解度隨溫度變化較大,如NaCl,KNO3。
2.蒸餾冷卻法:在沸點(diǎn)上差值大。乙醇中(水):加入新制的CaO吸收大部分水再蒸餾。
3.過(guò)濾法:溶與不溶。
4.升華法:SiO2(I2)。
5.萃取法:如用CCl4來(lái)萃取I2水中的I2。
6.溶解法:Fe粉(A1粉):溶解在過(guò)量的NaOH溶液里過(guò)濾分離。
7.增加法:把雜質(zhì)轉化成所需要的物質(zhì):CO2(CO):通過(guò)熱的CuO;CO2(SO2):通過(guò)NaHCO3溶液。
8.吸收法:用做除去混合氣體中的氣體雜質(zhì),氣體雜質(zhì)必須被藥品吸收:N2(O2):將混合氣體通過(guò)銅網(wǎng)吸收O2。
9.轉化法:兩種物質(zhì)難以直接分離,加藥品變得容易分離,然后再還原回去:Al(OH)3,Fe(OH)3:先加NaOH溶液把Al(OH)3溶解,過(guò)濾,除去Fe(OH)3,再加酸讓NaAlO2轉化成A1(OH)3
萃取:適用于一種溶質(zhì)在兩種互不相溶的溶劑中的溶解度相差很大的情況,如果想把這種溶質(zhì)從溶解度較小的溶劑中提取出來(lái),就選擇萃取的方法,如四氯化碳和水互不相溶,且四氯化碳比水更容易溶解碘,于是就可以用分液漏斗把碘單質(zhì)從飽和碘水中萃取出來(lái),溶解到四氯化碳里,再通過(guò)蒸餾把碘和四氯化碳分離開(kāi)來(lái)。
其實(shí)“萃取”和“分液”經(jīng)常合在一起用,不然的話(huà)沒(méi)法把溶質(zhì)分離出來(lái)。需要的情況下,還和“蒸餾”合用,就像上述的情況,要將溶質(zhì)和溶劑徹底分離。
分液:適用于分離兩種互不相溶,且密度相差較大的液體。如水和植物油的混合物,靜置后會(huì )上下分層,水在下層,植物油在上層。這時(shí)就可以用分液漏斗,打開(kāi)活塞至下層的水恰好流盡,用燒杯承接;再打開(kāi)玻璃塞讓植物油從上口倒出。
分餾:適用于分離沸點(diǎn)相近的液體混合物,如石油就是通過(guò)分餾的方法得到各組分,它們都是重要的化工產(chǎn)品:汽油、柴油、酒精等等。
蒸餾:適用于分離沸點(diǎn)相差較大的液體混合物,利用各組分的沸點(diǎn)不同,按沸點(diǎn)由低到高的順序分離出來(lái)。或除去易揮發(fā)、難揮發(fā)或不揮發(fā)的雜質(zhì)。如用蒸餾的方法減少自來(lái)水的Cl-雜質(zhì)。或把溶液中的溶劑分離出來(lái),如食鹽水通過(guò)蒸餾得到較為純凈的蒸餾水。
蒸發(fā):適用于分離溶液中的易揮發(fā)溶劑和溶質(zhì),和我說(shuō)的“蒸餾”的第二種情況差不多,但如果是要得到純凈的食鹽而不是水的話(huà),一般采用蒸發(fā)的方法而不是蒸餾。還有就是我所說(shuō)的“萃取”和“蒸發(fā)”合用的方法。
總之,化學(xué)分離方法是多種多樣的,要根據情況選擇合適的方法,有些方法則是相通的,要本著(zhù)科學(xué)性、安全性和簡(jiǎn)潔性的原則選擇方法。
科學(xué)方法是人類(lèi)所有認識方法中比較高級、比較復雜的一種方法。它具有以下特點(diǎn):
(1)鮮明的主體性,科學(xué)方法體現了科學(xué)認識主體的主動(dòng)性、創(chuàng )造性以及具有明顯的目的性;
(2)充分的合乎規律性,是以合乎理論規律為主體的科學(xué)知識程序化;
(3)高度的保真性,是以觀(guān)察和實(shí)驗以及他們與數學(xué)方法的有機結合對研究對象進(jìn)行量的考察,保證所獲得的實(shí)驗事實(shí)的客觀(guān)性和可靠性。
1.根據分子大小不同進(jìn)行分離純化 蛋白質(zhì)是一種大分子物質(zhì),并且不同蛋白質(zhì)的分子大小不同,因此可以利用一些較簡(jiǎn)單的方法使蛋白 質(zhì)和小分子物質(zhì)分開(kāi),并使蛋白質(zhì)混合物也得到分離。
根據蛋白質(zhì)分子大小不同進(jìn)行分離的方法主要有透析、超濾、離心和凝膠過(guò)濾等。透析和超濾是分離蛋白質(zhì)時(shí)常用的方法。
透析是將待分離的混合物放入半透膜制成的透析袋中,再浸入透析液進(jìn)行分離。超濾是利用離心力或壓力強行使水和其它小分子通過(guò)半透膜,而蛋白質(zhì)被截留在半透膜上的過(guò)程。
這兩種方法都可以將蛋白質(zhì)大分子與以無(wú)機鹽為主的小分子分開(kāi)。它們經(jīng)常和鹽析、鹽溶方法聯(lián)合使用,在進(jìn)行鹽析或鹽溶后可以利用這兩種方法除去引入的無(wú)機鹽。
由于超濾過(guò)程中,濾膜表面容易被吸附的蛋白質(zhì)堵塞,以致超濾速度減慢,截流物質(zhì)的分子量也越來(lái)越小。所以在使用超濾方法時(shí)要選擇合適的濾膜,也可以選擇切向流過(guò)濾得到更理想的效果 離心也是經(jīng)常和其它方法聯(lián)合使用的一種分離蛋白質(zhì)的方法。
當蛋白質(zhì)和雜質(zhì)的溶解度不同時(shí)可以利用離心的方法將它們分開(kāi)。例如,在從大米渣中提取蛋白質(zhì)的實(shí)驗中,加入纖維素酶和α-淀粉酶進(jìn)行預處理后,再用離心的方法將有用物質(zhì)與分解掉的雜質(zhì)進(jìn)行初步分離[3]。
使蛋白質(zhì)在具有密度梯度的介質(zhì)中離心的方法稱(chēng)為密度梯度(區帶)離心。常用的密度梯度有蔗糖梯度、聚蔗糖梯度和其它合成材料的密度梯度。
可以根據所需密度和滲透壓的范圍選擇合適的密度梯度。密度梯度離心曾用于純化蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白,得到的產(chǎn)品純度高但產(chǎn)量偏低。
蔣辰等[6]通過(guò)比較不同密度梯度介質(zhì)的分離效果,利用溴化鈉密度梯度得到了高純度的蘇云金芽孢桿菌伴孢晶體蛋白。凝膠過(guò)濾也稱(chēng)凝膠滲透層析,是根據蛋白質(zhì)分子大小不同分離蛋白質(zhì)最有效的方法之一。
凝膠過(guò)濾的原理是當不同蛋白質(zhì)流經(jīng)凝膠層析柱時(shí),比凝膠珠孔徑大的分子不能進(jìn)入珠內網(wǎng)狀結構,而被排阻在凝膠珠之外,隨著(zhù)溶劑在凝膠珠之間的空隙向下運動(dòng)并最先流出柱外;反之,比凝膠珠孔徑小的分子后流出柱外。目前常用的凝膠有交聯(lián)葡聚糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠等。
在甘露糖蛋白提純的過(guò)程中使用凝膠過(guò)濾方法可以得到很好的效果,純度鑒定證明產(chǎn)品為分子量約為32 kDa、成分是多糖∶蛋白質(zhì)(88∶12)、多糖為甘露糖的單一均勻糖蛋白[1]。凝膠過(guò)濾在抗凝血蛋白的提取過(guò)程中也被用來(lái)除去大多數雜蛋白及小分子的雜質(zhì)[7]。
2.根據溶解度不同進(jìn)行分離純化 影響蛋白質(zhì)溶解度的外部條件有很多,比如溶液的pH值、離子強度、介電常數和溫度等。但在同一條件下,不同的蛋白質(zhì)因其分子結構的不同而有不同的溶解度,根據蛋白質(zhì)分子結構的特點(diǎn),適當地改變外部條件,就可以選擇性地控制蛋白質(zhì)混合物中某一成分的溶解度,達到分離純化蛋白質(zhì)的目的。
常用的方法有等電點(diǎn)沉淀和pH值調節、蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析、有機溶劑法、雙水相萃取法、反膠團萃取法等。等電點(diǎn)沉淀和pH值調節是最常用的方法。
每種蛋白質(zhì)都有自己的等電點(diǎn),而且在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最 低;相反,有些蛋白質(zhì)在一定pH值時(shí)很容易溶解。因而可以通過(guò)調節溶液的pH值來(lái)分離純化蛋白質(zhì)。
王洪新等[8]研究茶葉蛋白質(zhì)提取過(guò)程發(fā)現,pH值為時(shí)茶葉蛋白提取效果最好,提取率達到36·8%,初步純化得率為91·0%。李殿寶[9]在從葵花脫脂粕中提取蛋白質(zhì)時(shí)將蛋白溶液的pH值調到3~4,使目標蛋白于等電點(diǎn)沉淀出來(lái)。
等電點(diǎn)沉淀法還應用于葡萄籽中蛋白質(zhì)的提取。李鳳英等[10]測得葡萄籽蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)為3·8。
他們利用堿溶法提取葡萄籽蛋白質(zhì),得到了最佳的提取工藝為:以1*10-5mol·L-1的NaOH溶液,按1∶5的料液比,在40℃攪拌40 min,葡萄籽蛋白質(zhì)提取率達73·78%。另外還可以利用堿法提取大米蛋白,其持水性、吸油性和起泡性等均優(yōu)于酶法提取[11]。
利用酸法提取得到的鰱魚(yú)魚(yú)肉蛋白質(zhì)無(wú)腥味、色澤潔白,蛋白質(zhì)產(chǎn)率高達90%[12]。 蛋白質(zhì)的鹽溶和鹽析是中性鹽顯著(zhù)影響球狀蛋白質(zhì)溶解度的現象,其中,增加蛋白質(zhì)溶解度的現象稱(chēng)鹽溶,反之為鹽析。
應當指出,同樣濃度的二價(jià)離子中性鹽,如MgCl2、(NH4)2SO4對蛋白質(zhì)溶解度影響的效果,要比一價(jià)離子中性鹽如NaCl、NH4Cl大得多。在葡萄籽蛋白提取工藝中除了可以利用堿溶法還可以利用鹽溶法來(lái)提取蛋白質(zhì),其最佳提取工藝是:以10%NaCl溶液,按1∶25的料液比,在30℃攪拌提取30min,蛋白質(zhì)提取率為57·25%[10]。
鹽析是提取血液中免疫球蛋白的常用方法,如多聚磷酸鈉絮凝法、硫酸銨鹽析法,其中硫酸銨鹽析法廣泛應用于生產(chǎn)。由于硫酸銨在水中呈酸性,為防止其對蛋白質(zhì)的破壞,應用氨水調pH值至中性。
為防止不同分子之間產(chǎn)生共沉淀現象,蛋白質(zhì)樣品的含量一般控制在0·2% ~2·0%。利用鹽溶和鹽析對蛋白質(zhì)進(jìn)行提純后,通常要使用透析或者凝膠過(guò)濾的方法除去中性鹽[13]。
有機溶劑提取法的原理是:與水互溶的有機溶劑(如甲醇、乙醇)能使一些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著(zhù)降低;而且在一定溫度、pH值和離子強度下,引起蛋白質(zhì)沉淀的有機溶劑的濃度不同,因此,控制有機溶劑的濃度可以分離。
1、超高壓提取法屬于非加熱處理加工法,可以克服傳統的加熱處理方法提取出的活性物質(zhì)活性低下的缺點(diǎn)。
優(yōu)點(diǎn):壓力迅速、均勻作用到要提取的素材,可以開(kāi)發(fā)出與熱處理方式不同物性的成分,具有與熱處理同樣高的提取效率。
缺點(diǎn):設備投資高昂,難以分解殘留的農藥,不同素材的壓強研究進(jìn)展緩慢。
2、超聲波提取法是利用多種不同的超聲波,引起分子振動(dòng)的技術(shù)。相比傳統的熱水提取法,超聲波提取法不會(huì )造成有效成分的破壞、損失較少,同時(shí),通過(guò)Cabitation過(guò)程可以穩定地提取有效成分。
優(yōu)點(diǎn):反應速度非常快,破壞植物組織很容易,可短期內提取出所需物質(zhì)最大限度維持活性物質(zhì)的功效,沒(méi)有殘留物。
缺點(diǎn):只有對物理上穩定的素材才適用,活性物質(zhì)容易被破壞,需要大量提取時(shí)效率低下。
分離提取的應用:
一,料液各組分的沸點(diǎn)相近,甚至形成共沸物,為精餾所不易奏效的場(chǎng)合,如石油餾分中烷烴與芳烴的分離,煤焦油的脫酚;
二,低濃度高沸組分的分離,用精餾能耗很大,如稀醋酸的脫水;
三,多種離子的分離,如礦物浸取液的分離和凈制,若加入化學(xué)品作分部沉淀,不但分離質(zhì)量差,又有過(guò)濾操作,損耗也大;
四,不穩定物質(zhì)(如熱敏性物質(zhì))的分離,如從發(fā)酵液制取青霉素。
擴展資料:
分離提取也叫萃取。
分離提取的原理:
利用物質(zhì)在兩種互不相溶(或微溶)的溶劑中溶解度或分配系數的不同,使物質(zhì)從一種溶劑內轉移到另外一種溶劑中。經(jīng)過(guò)反復多次萃取,將絕大部分的化合物提取出來(lái)。
溶劑萃取工藝過(guò)程一般由萃取、洗滌和反萃取組成。一般將有機相提取水相中溶質(zhì)的過(guò)程稱(chēng)為萃取(extraction),水相去除負載有機相中其他溶質(zhì)或者包含物的過(guò)程稱(chēng)為洗滌(scrubbing),水相解析有機相中溶質(zhì)的過(guò)程稱(chēng)為反萃取(stripping)。
分配定律是萃取方法理論的主要依據,物質(zhì)對不同的溶劑有著(zhù)不同的溶解度。同時(shí),在兩種互不相溶的溶劑中,加入某種可溶性的物質(zhì)時(shí),它能分別溶解于兩種溶劑中。
實(shí)驗證明,在一定溫度下,該化合物與此兩種溶劑不發(fā)生分解、電解、締合和溶劑化等作用時(shí),此化合物在兩液層中之比是一個(gè)定值。不論所加物質(zhì)的量是多少,都是如此。
參考資料:百度百科:萃取
膜分離技術(shù)的優(yōu)點(diǎn):1、在常溫下進(jìn)行:有效成分損失極少,特別適用于熱敏性物質(zhì),如抗生素等醫藥、果汁、酶、蛋白的分離與濃縮;2、無(wú)相態(tài)變化:保持原有的風(fēng)味,能耗極低,其費用約為蒸發(fā)濃縮或冷凍濃縮的1/3-1/8;3、無(wú)化學(xué)變化:典型的物理分離過(guò)程,不用化學(xué)試劑和添加劑,產(chǎn)品不受污染;4、選擇性好:可在分子級內進(jìn)行物質(zhì)分離,具有普遍濾材無(wú)法取代的卓越性能;5、適應性強:處理規模可大可小,可以連續也可以間隙進(jìn)行,工藝簡(jiǎn)單,操作方便,易于自動(dòng)化;6、能耗低:只需電能驅動(dòng),能耗極低,其費用約為蒸發(fā)濃縮或冷凍濃縮的1/3-1/8。
缺點(diǎn):1、膜技術(shù)雖然濃縮成本低,但不能將產(chǎn)品濃縮成干物質(zhì);2、膜技術(shù)雖然具有選擇過(guò)濾性,但是同分異構體就無(wú)法實(shí)現分離。膜分離技術(shù),是指在分子水平上不同粒徑分子的混合物在通過(guò)半透膜時(shí),實(shí)現選擇性分離的技術(shù)。
由于兼有分離、濃縮、純化和精制的功能,又有高效、節能、環(huán)保、分子級過(guò)濾及過(guò)濾過(guò)程簡(jiǎn)單、易于控制等特征,因此,已廣泛應用于食品、醫藥、生物、環(huán)保、化工、冶金、能源、石油、水處理、電子、仿生等領(lǐng)域,產(chǎn)生了巨大的經(jīng)濟效益和社會(huì )效益,已成為當今分離科學(xué)中最重要的手段之一。應用領(lǐng)域:1、微濾具體涉及領(lǐng)域主要有:醫藥工業(yè)、食品工業(yè)(明膠、葡萄酒、白酒、果汁、牛奶等)、高純水、城市污水、工業(yè)廢水、飲用水、生物技術(shù)、生物發(fā)酵等。
2、超濾早期的工業(yè)超濾應用于廢水和污水處理。三十多年來(lái),隨著(zhù)超濾技術(shù)的發(fā)展,如今超濾技術(shù)已經(jīng)涉及食品加工、飲料工業(yè)、醫藥工業(yè)、生物制劑、中藥制劑、臨床醫學(xué)、印染廢水、食品工業(yè)廢水處理、資源回收、環(huán)境工程等眾多領(lǐng)域。
3、納濾納濾的主要應用領(lǐng)域涉及:食品工業(yè)、植物深加工、飲料工業(yè)、農產(chǎn)品深加工、生物醫藥、生物發(fā)酵、精細化工、環(huán)保工業(yè)等。4、反滲透由于反滲透分離技術(shù)的先進(jìn)、高效和節能的特點(diǎn),在國民經(jīng)濟各個(gè)部門(mén)都得到了廣泛的應用,主要應用于水處理和熱敏感性物質(zhì)的濃縮,主要應用領(lǐng)域包括以下:食品工業(yè)、牛奶工業(yè)、飲料工業(yè)、植物(農產(chǎn)品)深加工、生物醫藥、生物發(fā)酵、制備飲用水、純水、超純水、海水、苦咸水淡化、電力、電子、半導體工業(yè)用水、醫藥行業(yè)工藝用水、制劑用水、注射用水、無(wú)菌無(wú)熱源純水、食品飲料工業(yè)、化工及其它工業(yè)的工藝用水、鍋爐用水、洗滌用水及冷卻用水。
5、其他除了以上四種常用的膜分離過(guò)程,另外還有滲析、控制釋放、膜傳感器、膜法氣體分離、液膜分離法等。
(一)水溶液提取法 稀鹽和緩沖系統的水溶液對蛋白質(zhì)穩定性好、溶解度大、是提取蛋白質(zhì)最常用的溶劑,通常用量是原材料體積的1-5倍,提取時(shí)需要均勻的攪拌,以利于蛋白質(zhì)的溶解。
提取的溫度要視有效成份性質(zhì)而定。一方面,多數蛋白質(zhì)的溶解度隨著(zhù)溫度的升高而增大,因此,溫度高利于溶解,縮短提取時(shí)間。
但另一方面,溫度升高會(huì )使蛋白質(zhì)變性失活,因此,基于這一點(diǎn)考慮提取蛋白質(zhì)和酶時(shí)一般采用低溫(5度以下)操作。為了避免蛋白質(zhì)提以過(guò)程中的降解,可加入蛋白水解酶抑制劑(如二異丙基氟磷酸,碘乙酸等)。
下面著(zhù)重討論提取液的pH值和鹽濃度的選擇。1、pH值 蛋白質(zhì),酶是具有等電點(diǎn)的兩性電解質(zhì),提取液的pH值應選擇在偏離等電點(diǎn)兩側的pH 范圍內。
用稀酸或稀堿提取時(shí),應防止過(guò)酸或過(guò)堿而引起蛋白質(zhì)可解離基團發(fā)生變化,從而導致蛋白質(zhì)構象的不可逆變化,一般來(lái)說(shuō),堿性蛋白質(zhì)用偏酸性的提取液提取,而酸性蛋白質(zhì)用偏堿性的提取液。2、鹽濃度 稀濃度可促進(jìn)蛋白質(zhì)的溶,稱(chēng)為鹽溶作用。
同時(shí)稀鹽溶液因鹽離子與蛋白質(zhì)部分結合,具有保護蛋白質(zhì)不易變性的優(yōu)點(diǎn),因此在提取液中加入少量NaCl等中性鹽,一般以0.15摩爾。升濃度為宜。
緩沖液常采用0.02-0.05M磷酸鹽和碳酸鹽等滲鹽溶液。(二)有機溶劑提取法 一些和脂質(zhì)結合比較牢固或分子中非極性側鏈較多的蛋白質(zhì)和酶,不溶于水、稀鹽溶液、稀酸或稀堿中,可用乙醇、丙酮和丁醇等有機溶劑,它們具的一定的親水性,還有較強的親脂性、是理想的提脂蛋白的提取液。
但必須在低溫下操作。丁醇提取法對提取一些與脂質(zhì)結合緊密的蛋白質(zhì)和酶特別優(yōu)越,一是因為丁醇親脂性強,特別是溶解磷脂的能力強;二是丁醇兼具親水性,在溶解度范圍內(度為10%,40度為6.6%)不會(huì )引起酶的變性失活。
另外,丁醇提取法的pH及溫度選擇范圍較廣,也適用于動(dòng)植物及微生物材料。二、蛋白質(zhì)的分離純化 蛋白質(zhì)的分離純化方法很多,主要有:(一)根據蛋白質(zhì)溶解度不同的分離方法1、蛋白質(zhì)的鹽析 中性鹽對蛋白質(zhì)的溶解度有顯著(zhù)影響,一般在低鹽濃度下隨著(zhù)鹽濃度升高,蛋白質(zhì)的溶解度增加,此稱(chēng)鹽溶;當鹽濃度繼續升高時(shí),蛋白質(zhì)的溶解度不同程度下降并先后析出,這種現象稱(chēng)鹽析,將大量鹽加到蛋白質(zhì)溶液中,高濃度的鹽離子(如硫酸銨的SO4和NH4)有很強的水化力,可奪取蛋白質(zhì)分子的水化層,使之“失水”,于是蛋白質(zhì)膠粒凝結并沉淀析出。
鹽析時(shí)若溶液pH在蛋白質(zhì)等電點(diǎn)則效果更好。由于各種蛋白質(zhì)分子顆粒大小、親水程度不同,故鹽析所需的鹽濃度也不一樣,因此調節混合蛋白質(zhì)溶液中的中性鹽濃度可使各種蛋白質(zhì)分段沉淀。
影響鹽析的因素有:(1)溫度:除對溫度敏感的蛋白質(zhì)在低溫(4度)操作外,一般可在室溫中進(jìn)行。一般溫度低蛋白質(zhì)溶介度降低。
但有的蛋白質(zhì)(如血紅蛋白、肌紅蛋白、清蛋白)在較高的溫度(25度)比0度時(shí)溶解度低,更容易鹽析。(2)pH值:大多數蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)在濃鹽溶液中的溶介度最低。
(3)蛋白質(zhì)濃度:蛋白質(zhì)濃度高時(shí),欲分離的蛋白質(zhì)常常夾雜著(zhù)其他蛋白質(zhì)地一起沉淀出來(lái)(共沉現象)。因此在鹽析前血清要加等量生理鹽水稀釋?zhuān)沟鞍踪|(zhì)含量在2.5-3.0%。
蛋白質(zhì)鹽析常用的中性鹽,主要有硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、氯化鈉、磷酸鈉等。 其中應用最多的硫酸銨,它的優(yōu)點(diǎn)是溫度系數小而溶解度大(25度時(shí)飽和溶液為4.1M,即767克/升;0度時(shí)飽和溶解度為3.9M,即676克/升),在這一溶解度范圍內,許多蛋白質(zhì)和酶都可以鹽析出來(lái);另外硫酸銨分段鹽析效果也比其他鹽好,不易引起蛋白質(zhì)變性。
硫酸銨溶液的pH常在4.5-5.5之間,當用其他pH值進(jìn)行鹽析時(shí),需用硫酸或氨水調節。 蛋白質(zhì)在用鹽析沉淀分離后,需要將蛋白質(zhì)中的鹽除去,常用的辦法是透析,即把蛋白質(zhì)溶液裝入秀析袋內(常用的是玻璃紙),用緩沖液進(jìn)行透析,并不斷的更換緩沖液,因透析所需時(shí)間較長(cháng),所以最好在低溫中進(jìn)行。
此外也可用葡萄糖凝膠G-25或G-50過(guò)柱的辦法除鹽,所用的時(shí)間就比較短。2、等電點(diǎn)沉淀法 蛋白質(zhì)在靜電狀態(tài)時(shí)顆粒之間的靜電斥力最小,因而溶解度也最小,各種蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)有差別,可利用調節溶液的pH達到某一蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)使之沉淀,但此法很少單獨使用,可與鹽析法結合用。
3、低溫有機溶劑沉淀法 用與水可混溶的有機溶劑,甲醇,乙醇或丙酮,可使多數蛋白質(zhì)溶解度降低并析出,此法分辨力比鹽析高,但蛋白質(zhì)較易變性,應在低溫下進(jìn)行。(二)根據蛋白質(zhì)分子大小的差別的分離方法1、透析與超濾 透析法是利用半透膜將分子大小不同的蛋白質(zhì)分開(kāi)。
超濾法是利用高壓力或離心力,強使水和其他小的溶質(zhì)分子通過(guò)半透膜,而蛋白質(zhì)留在膜上,可選擇不同孔徑的瀘膜截留不同分子量的蛋白質(zhì)。2、凝膠過(guò)濾法 也稱(chēng)分子排阻層析或分子篩層析,這是根據分子大小分離蛋白質(zhì)混合物最有效的方法之一。
柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝膠(Sephadex ged)和瓊脂糖凝膠(agarose gel)。(三)根據蛋白質(zhì)帶電性質(zhì)進(jìn)行分離 蛋白質(zhì)在不同pH環(huán)境中帶電性質(zhì)和電荷數量不同,可將其分開(kāi)。
1、電泳法 各種蛋白質(zhì)在同。
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