dna的提取鑒定方法(提取DNA的方法)
1.提取DNA的方法有哪些
DNA提取的幾種方法
(1).濃鹽法
利用RNP和DNP在電解溶液中溶解度不同，將二者分離，常用的方法是用1M 氯 納提取化鈉抽提，得到的DNP粘液與含有少量辛醇的 氯仿一起搖蕩，使乳化，再離心除去蛋白質(zhì)，此時蛋白質(zhì)凝膠停留在水相及氯仿相中間，而DNA位于上層水相中，用2倍體積95%乙醇可將DNA 鈉鹽沉淀出來.
也可用0.15 MNaCL液反復(fù)洗滌細胞破碎液除去RNP，再以1MNaCL提取脫氧核糖蛋白，再按氯仿---異醇法除去蛋白.
兩種方法比較，后種方法使核酸降解可能少一些.
以稀鹽酸溶液提取DNA 時，加入適量去污劑，如SDS可有助于蛋白質(zhì)與DNA 的分離.在提取過程中為抑制組織中的DNase對DNA 的降解作用，在氯化鈉溶液中加入檸檬酸鈉作為金屬離子的烙合劑.通常用.15MNaCL,0.015M檸檬鈉，并稱SSC溶液，提取DNA.
(2).陰離子去污劑法：
用SDS或二甲苯酸鈉等去污劑使蛋白質(zhì)變性，可以直接從生物材料中提取DNA .由于細胞中DNA與蛋白質(zhì)之間常借靜電引力或配位鍵結(jié)合，因為陰離子去污劑能夠破壞這種價鍵，所以常用陰離子去污劑提取DNA.
(3).苯酚抽提法：
苯酚作為蛋白變性劑，同時抑制了DNase的降解作用.用苯酚處理勻漿液時，由于蛋白與DNA 聯(lián)結(jié)鍵已斷，蛋白分子表面又含有很多極性基團與苯酚相似相溶.蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相.離心分層后取出水層，多次重復(fù)操作，再合并含DNA 的水相，利用核酸不溶于醇的性質(zhì)，用乙醇沉淀DNA .此時DNA是十分粘稠的物質(zhì)，可用玻璃漫漫繞成一團，取出.此法的特點是使提取的DNA保持天然狀態(tài) .
( 4).水抽提法：
利用核酸溶解于水的性質(zhì)，將組織細胞破碎后，用低鹽溶液除去RNA，然后將沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中，離心后收集上清液.在上清中加入固體氯化鈉調(diào)節(jié)至2.6M.加入2倍體積95%乙醇，立即用攪拌法攪出.然后分別用66% 80%和95%乙醇以及丙銅洗滌，最后在空氣中干燥，既得DNA樣品.此法提取的DNA中蛋白質(zhì)含量較高，故一般不用.為除蛋白可將此法加以改良，在提取過程中加入SDS.
2.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、甲酰胺解聚法、玻璃棒纏繞法、異丙醇bai沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制du備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則
1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性；
2、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子；
3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)zhi降低到最低程度；
4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。
擴展資料
提取daoDNA的注意事項
1、各操作內(nèi)步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類成分干擾。
3、要減少DNA的降解，促進DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過程中所用到的試劑和器材容要通過高壓烤干等辦法進行無核酸酶化處理。
5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來源：百度百科-dna提取
3.DNA實驗室常用的DNA提取方法有哪些
提取DNA主要有SDS和CTAB法，其實提取效果的好壞主要看提取的對象是什么樣的材料，在提取之前一定要好好分析材料的特性，然后在設(shè)計實驗步驟。
一）CTAB法
CTAB是一種去污劑，可溶解細胞膜，它能與核酸形成復(fù)合物，在高鹽溶液中（0.7 mol/L NaCl）是可溶的，當(dāng)降低溶液鹽濃度到一定程度（0.3 mol/L NaCl）時，從溶液中沉淀，通過離心就可將CTAB與核酸的復(fù)合物同蛋白質(zhì)、多糖類物質(zhì)分開，然后將CTAB與核酸的復(fù)合物沉淀溶解于高鹽溶液，再加入乙醇使核酸沉淀，CTAB能溶解于乙醇。
（二）SDS法
利用高濃度的SDS，在較高溫度（55—65℃）條件下裂解細胞，使染色體離析，蛋白質(zhì)變性，釋放出核酸，然后采用提高鹽濃度及降低溫度的做法使蛋白質(zhì)及多糖雜質(zhì)沉淀（最常用的是加入5M的KAc于冰上保溫，在低溫條件下KAc與蛋白質(zhì)及多糖結(jié)合成不溶物），離心除去沉淀后，上清液中的DNA用酚/氯仿抽提，反復(fù)抽提后用乙醇沉淀水相中的DNA。
以下是在提取熱帶水果DNA時設(shè)計的兩種不同方法步驟，對比起來CTAB法好，在禾本科植物效果差不多！
1、CTAB法
1） 在所需量的CTAB抽提液中加入2-巰基乙醇，使終濃度達2%(v/v)。將此溶液預(yù)熱至65℃。
對于每克新鮮的葉組織大約需要4ml的2-ME/CTAB抽提液。
2） 用液氮（-196℃）或干冰（-78℃）冷卻粉碎器/勻漿器，將0.5 g植物組織粉碎成細粉，然后將組織轉(zhuǎn)移到2.0 ml離心管。
3） 加入800 μl預(yù)熱的2-Me/CTAB，混合使之充分濕潤，于65℃溫育20 min，不時顛倒混勻。
4） 待冷至室溫后，加入800 μl氯仿/異戊醇（24:1），顛倒混勻至溶液呈乳濁狀----但不要振蕩。25℃，10000 rpm離心10 min。
5） 上清（~700 μl）轉(zhuǎn)移至另一干凈的離心管中，加入5 μl RNaseA貯液，37℃溫育30 min。
6） 加入700 μl氯仿/異戊醇，顛倒混勻，25℃，10000 rpm離心10 min。
7） 上清（~600 μl）轉(zhuǎn)移至另一干凈的1.5 ml離心管中，加入600 μl異丙醇，顛倒混勻，室溫或-20℃放置20 min。
8) 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。
9） 去上清，加1 ml70%乙醇洗滌沉淀兩次。（25℃，12000 rpm，離心10 min）
10）涼干DNA，溶于50 μl ddH2O,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
2、SDS法
① 將0.3 g植物材料于液氮速凍，然后在研缽中將其磨碎，將粉末轉(zhuǎn)至2 ml離心管中。
② 加入1.2 ml預(yù)熱至65℃的提取緩沖液（其中加入3 μl β—巰基乙醇，增加DNA的穩(wěn)定性），置65℃水浴中放置30分鐘，不時顛倒混勻。
③ 加入0.45 ml 5M的醋酸鉀，混勻，冰浴20分鐘，在10000 rpm離心20 min。需要的話，Miracloth紗布過濾除去沉淀，上清液轉(zhuǎn)入另一離心管中。
④ 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），輕輕顛倒混勻，12000 rpm離心15 min。
⑤ 轉(zhuǎn)移上清液到另一新離心管中，加5 μl RNaseA貯液，37℃溫育30 min。
⑥ 加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），輕輕顛倒混勻，12000 rpm離心15 min。
⑦ 轉(zhuǎn)移上清液到另一新離心管中，加入0.7V異丙醇，輕輕顛倒混勻，-20℃放置30分鐘沉淀核酸。
⑧ 25℃，12000 rpm，離心10 min，收集沉淀。
⑨ 棄上清，70%乙醇洗兩次。
⑩ 涼干DNA，溶于50 μl ddH2O,4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
4.DNA的提取與鑒定
你是說DNA 的提取方法么？現(xiàn)在正在做這方面試驗，希望能幫得上你
1） 研磨：取樣少許置入1.5ml離心管中，以移液槍加入消化緩沖液600μl，沖入液氮或少許石英砂研磨至澄清。
2） 水浴：水浴溫度55℃，水浴時間3-5h左右
3） 酚抽提：每支離心管中加入600μl Tris飽和酚，輕柔的搖晃使固液混合充分。離心機4℃，8000r/min離心10min，以移液槍小心的將上清液取出至新管，重復(fù)步驟一次
4) Cl抽提：向抽提出的上清液中加入等體積的Cl液，輕柔的搖晃使充分混勻，高速冷凍離心機4℃，10000r/min離心10min，以液槍小心的將上清液取出。
5) DNA沉淀：向抽提的上清液中加入2倍體積的無水乙醇，并輕柔的搖晃使溶液充分，再置于-20℃冰箱中保存10min后高速冷凍離心機4℃，12000r/min離心5min，小心傾去乙醇，可見DNA沉淀物。
6) DNA 洗滌：向在留有DNA沉淀物的離心管中加入-20℃冰箱中保存的70%乙醇500μl，后離心機4℃，12000r/min離心5min，小心傾去乙醇后可見離心管底白色小圓片狀的DNA提取物。將離心管倒置于無菌室內(nèi)室溫至干燥。
7) DNA溶解：向干燥好的DNA提取物中加入30μl去離子水，4℃冰箱保存
5.DNA提取的方法有幾種分別是什么,哪種是現(xiàn)在最常用的
關(guān)于DNA的提取方法在《分子克隆》一書中有詳細介紹，其中最常用的質(zhì)粒提取方法包括： SDS堿裂解法制備質(zhì)粒DNA煮沸裂解法制備質(zhì)粒DNA牙簽法小量制備質(zhì)粒DNASDS裂解法提取質(zhì)粒DNA 這其中SDS堿裂解法又是最常使用的提取方法。
當(dāng)然針對不同組織樣品DNA的提取方法是不同的，具體還是要參考《分子克隆》等工具書。 另外，針對不同組織的DNA樣品，就是都有很多成熟的試劑盒可以使用。
如果不是大批量使用或者經(jīng)費充足的話，可以考慮購買試劑盒，一般可以提取到更高質(zhì)量的DNA，并且也可以節(jié)約不少自己摸索的時間。
6.DNA的提取方法有多少種
DNA的提取方法有7種：酚抽提法、沉淀法、表面活性劑快速制備法、加熱法快速制備、堿變性快速制備。
DNA的提取原則 1、保證核酸一級結(jié)構(gòu)的完整性； 2、核酸樣品中不應(yīng)存在對酶有抑制作用的有機溶劑和過高濃度的金屬離子； 3、其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到最低程度； 4、其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。 擴展資料提取DNA的注意事項 1、各操作步驟要輕柔，盡量減少DNA的人為降解。
2、注意防止非核酸類成分干擾。 3、要減少DNA的降解，促進DNA與蛋白等的分相及DNA沉淀。
4、提取DNA過程中所用到的試劑和器材要通過高壓烤干等辦法進行無核酸酶化處理。 5、所有試劑均用高壓滅菌雙蒸水配制。
參考資料來源：百度百科-dna提取。
7.DNA鑒定方法有幾種
標(biāo)準(zhǔn)檢體︰
1. 口腔黏膜【以本中心提供之口腔棉棒采檢，棉棒須干燥保存?！?/p>
2. 血液【以紫頭EDTA采血管采集2-3ML，室溫保存寄送即可。 】
特殊檢體︰
1. 血漬【止血棉球，包過傷口的繃帶，沾血的紗布或衛(wèi)生紙，請裝入全新紙袋中?！?/p>
2. 耳用棉花棒【棉花棒，請裝入全新紙袋中?！?/p>
3. 手或腳指甲【必需剪下接近皮膚部份，請裝入全新紙袋中。】
4. 梳子【必需為同一人使用之梳子，請裝入全新紙袋中?！?/p>
5. 精液【保險套，內(nèi)衣，衣服，等等……（1）液體精液： 將精液樣本沾到干凈的樣本收集器上（棉花棒，由本中心提供）.等它干約一個小時左右. （2）干的精液：先將樣本收集器沾蒸餾水用濕，再將沾精液沾到樣本收集器上.同樣等它干約一個小時左右，請裝入全新紙袋中?！?/p>
6. 牙齒【臼齒，前臼齒，或犬齒 （嬰兒齒無法使用），請裝入全新紙袋中。】
7. 牙刷【晾干牙刷約30-60分鐘，請放入密封保鮮袋中（全新袋子）?！?/p>
8. 牙簽【請使用時不要用手觸碰到，請裝入全新紙袋中?！?/p>
9. 使用過的手帕【鼻涕，請裝入全新紙袋中。】
10. 使用過的衛(wèi)生紙【鼻涕，請裝入全新紙袋中。】
11. 絨毛【10mg請?zhí)峁┠赣H檢體供比對之用。】
12. 羊水【10ml請?zhí)峁┠赣H檢體供比對之用。】
13. 組織【5mm冷凍或冷藏保存，或置于PBS buffer中冷藏保存?！?/p>
14. 臍帶血【1ml請取得母親血液供比對之用?！?/p>
15. 頭發(fā)【6-10根，需有發(fā)根（毛囊）。】
