細(xì)菌的代謝產(chǎn)物實(shí)驗(yàn)(細(xì)菌溶解產(chǎn)物的注意事項(xiàng))

1.細(xì)菌溶解產(chǎn)物的注意事項(xiàng)

1.如服用本品后出現(xiàn)高熱（39℃以上，孤立于病史）， 特別在治療開始時(shí)，應(yīng)停止使用本品，并咨詢醫(yī)生。應(yīng) 基于喉部、鼻部或耳部癥狀進(jìn)行判斷，熱型應(yīng)于原發(fā)疾 病引起的發(fā)熱鑒別。2.有報(bào)道服用含細(xì)菌提取物藥物的易感患者中觀察到哮 喘發(fā)作的表現(xiàn)。在這些病例，不應(yīng)繼續(xù)服用本品。3.如有持續(xù)胃腸、呼吸系統(tǒng)反應(yīng)，應(yīng)停止使用本品，并 咨詢醫(yī)生。4.本品可能導(dǎo)致過敏反應(yīng)，如服用本品后出現(xiàn)皮膚反 應(yīng)，應(yīng)停止使用本品，并咨詢醫(yī)生。

2.細(xì)菌的哪些代謝產(chǎn)物對(duì)細(xì)菌鑒定有意義

其實(shí)意義不是很大，一般是根據(jù)《伯氏細(xì)菌手冊(cè)》看的，不過現(xiàn)在基本上都是用16S RNA來鑒定，要精確一些。

舉例如下：（1）細(xì)菌生化試驗(yàn) 各種細(xì)菌所具有的酶系統(tǒng)不盡相同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)的分解能力也不一樣，因而代謝產(chǎn)物或多或少地各有區(qū)別，可供鑒別細(xì)菌之用。用生化試驗(yàn)的方法檢測(cè)細(xì)菌對(duì)各種基質(zhì)的代謝作用及其代謝產(chǎn)物，從而鑒別細(xì)菌的種屬，稱之為細(xì)菌的生化反應(yīng)。

（2）糖（醇）類發(fā)酵試驗(yàn) 不同的細(xì)菌含有發(fā)酵不同糖（醇）的酶，因而發(fā)酵糖（醇）的能力各不相同。其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同，如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣，有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。

酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判定。在配制培養(yǎng)基時(shí)預(yù)先加入溟甲酚紫[P HS . 2 （黃色）一6 . 8 （紫色）] ，當(dāng)發(fā)酵產(chǎn)酸時(shí)，可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色。

氣體產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來證明。（3）甲基紅（Methylred ）試驗(yàn)（該試驗(yàn)簡(jiǎn)稱MR 試驗(yàn)） 很多細(xì)菌，如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸再被分解，產(chǎn)生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基的pH 降低到4 . 2 以下，這時(shí)若加甲基紅指示劑呈現(xiàn)紅色。

因甲基紅指示劑變色范圍是pH4 . 4 （紅色）一pH6 . 2 （黃色）。若某些細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，但很快將丙酮酸脫梭，轉(zhuǎn)化成醇等物，則培養(yǎng)基的pH 仍在6 . 2 以上，故此時(shí)加入甲基紅指示劑，呈現(xiàn)黃色。

（4）大分子物質(zhì)代謝實(shí)驗(yàn). 靛基質(zhì)（口引睬）試驗(yàn) 某些細(xì)菌，如大腸桿菌，能分解蛋白質(zhì)中的色氨酸，產(chǎn)生靛基質(zhì)（叫睬），靛基質(zhì)與對(duì)二甲基氨基苯甲醛結(jié)合，形成玫瑰色靛基質(zhì)（紅色化合物）。硫化氫試驗(yàn) 某些細(xì)菌能分解含硫的氨基酸（肌氨酸、半肌氨酸等），產(chǎn)生硫化氫，硫化氫與培養(yǎng)基中的鉛鹽或鐵鹽，形成黑色沉淀硫化鉛或硫化鐵。

為硫化氫試驗(yàn)陽性，可借以鑒別細(xì)菌。明膠液化實(shí)驗(yàn) 某些細(xì)菌具有膠原酶，使明膠被分解，失去凝固能力，呈現(xiàn)液體狀態(tài)，是為陽性。

淀粉水解試驗(yàn)（在紫外誘變中做，本實(shí)驗(yàn)不做） 細(xì)菌對(duì)大分子的淀粉不能直接利用，須靠產(chǎn)生的胞外酶（淀粉酶）將淀粉水解為小分子糊精或進(jìn)一步水解為葡萄糖（或麥芽糖），再被細(xì)菌吸收利用，細(xì)菌水解淀粉的過程可通過底物的變化來證明，即用碘測(cè)定不再產(chǎn)生藍(lán)色。（5）有機(jī)酸鹽及氨鹽利用試驗(yàn) 檸檬酸鹽利用試驗(yàn) 檸檬酸鹽培養(yǎng)基系一綜合性培養(yǎng)基，其中檸檬酸鈉為碳的唯一來源。

而磷酸二氫按是氮的唯一來源。有的細(xì)菌如產(chǎn)氣桿菌，能利用檸檬酸鈉為碳源，因此能在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，并分解檸檬酸鹽后產(chǎn)生碳酸鹽，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性。

此時(shí)培養(yǎng)基中的溟廖香草酚藍(lán)指示劑由綠色變?yōu)樯钏{(lán)色。不能利用檸檬酸鹽為碳源的細(xì)菌，在該培養(yǎng)基上不生長(zhǎng)，培養(yǎng)基不變色。

2、實(shí)驗(yàn)儀器，材料和用具 （1）實(shí)驗(yàn)儀器37OC 恒溫培養(yǎng)箱、20OC 恒溫培養(yǎng)箱（室溫代替）。（2）微生物材料 大腸桿菌、變形桿菌、枯草桿菌、產(chǎn)氣桿菌這四種菌種的斜面各1 支。

（3）試劑 甲基紅試劑、V . P 試劑、叫噪試劑、格里斯試劑（硝酸鹽利用試驗(yàn)）、盧戈氏碘液（淀粉水解試驗(yàn)） （4）實(shí)驗(yàn)用具 試管：每份每個(gè)試驗(yàn)2 根試驗(yàn)，1 根對(duì)照，8 個(gè)試驗(yàn)共27 根。無菌乎皿：每份2 個(gè) 杜氏小管：每份6 個(gè)。

接種環(huán)、酒精燈、試管架、記號(hào)筆。（5）培養(yǎng)基 葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基和乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基：何份各6 支試管，何支5 一10mi 培養(yǎng)基，滅菌。

用于糖類發(fā)酵試驗(yàn)。葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基：每份3 支試管，何支5 一10mi 培養(yǎng)基，滅菌。

用于甲基紅和V . P 試驗(yàn)。胰蛋白水培養(yǎng)基：每份3 支何支5 一10mi 培養(yǎng)基，滅菌。

用于叫睬試驗(yàn)。檸檬酸鐵錢或醋酸鉛的半固體培養(yǎng)基；每份3 支，每支5 一10ml 培養(yǎng)基，滅菌。

用于硫化氫試驗(yàn)。營(yíng)養(yǎng)明膠培養(yǎng)基：每份3 支，每支.5 一10ml 培養(yǎng)基、滅菌。

用于明膠液化試驗(yàn)。淀粉培養(yǎng)基：每份2 個(gè)平皿，每平皿約20ml 培養(yǎng)基，滅菌后倒入平皿。

用于淀粉水解試驗(yàn)。檸檬酸鈉培養(yǎng)基：每份3 支，每支5 一IOml 培養(yǎng)基，滅菌，做斜面。

用于檸檬酸鹽利用試驗(yàn)。3、實(shí)驗(yàn)步驟 （1）糖（醇）類發(fā)酵試驗(yàn) 編號(hào)在各試管上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基名稱，所接種的菌名和組號(hào)，下同。

接種取葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基3 支，按編號(hào)1 支接種大腸桿菌，另1 支接種普通變形桿菌，第3 支不接種，作為對(duì)照C 同樣取3 支乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基，1 支接種大腸桿菌，1 支接科普通變形桿菌，第3 支不接種，作為對(duì)照。將己接種好的培養(yǎng)基置37OC 溫箱中培養(yǎng)24h 。

觀察結(jié)果：被檢細(xì)菌若能發(fā)酵培養(yǎng)基中的糖時(shí)，則使培養(yǎng)基的pH 降低，這時(shí)培養(yǎng)基中的指示劑呈酸性反應(yīng)（為黃色），若發(fā)酵培養(yǎng)基中的糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則培養(yǎng)基不僅顯酸色反應(yīng)，并且在培養(yǎng)基中倒置的小玻璃管（杜氏小管）中有氣體。氣體占整個(gè)倒置小玻管的10 %以上。

若被檢細(xì)菌不分解培養(yǎng)基中的糖，則培養(yǎng)基不發(fā)生變化。（2）甲基紅試驗(yàn)（MR 試驗(yàn)） 將大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌分別接種到葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基中，37OC 培養(yǎng)48h ，加甲基紅指示劑數(shù)滴，觀察結(jié)果，呈現(xiàn)紅色者為陽性，呈現(xiàn)黃色者為陰性。

（3）伏一普二氏試驗(yàn)（V . P .試驗(yàn)） 將被檢菌接種到葡萄糖蛋白陳水培養(yǎng)基中，37OC 培養(yǎng)48h ，取出，加入40 % KOlls 一10 滴，然后再加入等量的5 %。一蔡酚溶液，用力振蕩，再放入37OC 溫箱中保溫巧一30min 。